FACSCalibur流式细胞仪操作维护规范流程.docVIP

FACSCalibur流式细胞仪操作维护规程 1. 目的 规范流式细胞仪FACSCalibur操作维护规程，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行和设备安全。 2. 适用范围 适用流式细胞仪FACSCalibur的使用操作。 3. 职责 3.1操作人员按照本规程操作仪器，对仪器进行正常维护，并作使用记录。 3.2保管人负责监督仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护和保养。 3.3仪器管理人以及科室负责人负责仪器综合管理。 4. 操作程序 4.1安全操作注意事项和特别提示： 4.1.1该仪器必须有专人保管，使用前需通读仪器说明书。 4.1.2严格遵守操作规程，如仪器出现故障，应马上停止使用，并立即向保管人、仪器管理人以及科室负责人报告，严格按照单位有关制度实施，不得擅自“修理”，查明原因，处理后仪器保管人应及时做好故障情况及维修记录。 4.2设备每日开机程序： 4.2.1开启稳压电源、变压器，打开流式细胞仪电源。 4.2.2开启其它周边配备电源，如打印机，开启计算机。 4.2.3确认鞘液筒有八分满，废液桶近似空的，桶盖是旋紧的；所有管线及管路装置连接通畅，无扭曲、折叠。 4.2.4将气压阀方向调在加压位置，用手感觉鞘液桶在慢慢鼓起。 4.2.5排除液流过滤器中的气泡。 4.2.6等待机器预热5---10分钟后可开始实验。 4.3 设备质控程序： 4.3.1试剂准备： 取试剂盒中的Unlabeled试剂，充分混匀，加一滴到装有1ml鞘液的试管中，混匀，标记为unlabeled。 取FITC、PE、PerCP、Unlabeled试剂 ，充分混匀，各加一滴到第二支装有3ml鞘液的试管中，混匀，标记为mixed。 4.3.2 上机操作： 按电脑桌面的FacsComp进入质控程序。 在出现的“Sign in” 窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息；单击“Accept”。 在试验选项中，选择 Lyse/No-Wash(LNW)：免洗程序。 在Calibrite Beads Lot IDs中,根据每种颜色的beads所对应的Lot Ids，输入编号，此编号在Calibrite beads试剂盒内，打开新买的试剂盒，里面有一张橙色胶纸，取出贴在试剂盒的背面，标题是Calibrite beads? 3 Batch NO, 选择FACS Flow Sheath下的编号(右侧的编号)。APC Lot ID(此栏不能空，即使是三色校正试剂) 。 在右侧的保存选项中文件会自动保存,路径Facstation\BD file\FACSComp\DDMMYY,还可以单击“Location” 改变文件保存路径。 按Run开始上样，在仪器面板上按Run Hi。高速运行，速度不能低于400个细胞/秒，速度过低可在管中加一滴微球。 上第一管后，按Start键，仪器自动调节PMT,完成后窗口底部出现“PMT set Successfully”,暂停5秒后自动进入下一个调节窗口。注意：速度不能低于400个细胞/秒，速度过低可在管中加一滴微球。 上第二管，单击Start，仪器开始自动调节补偿并进行灵敏度测试。 完成后仪器会给出提示，最后软件给出一个Summary Report。检查报告中的“Result”是否都PASS，如果有的没有PASS，检测原因。①是否试剂过期，②两个试管中的液体和鞘液桶中的是否相同, ③仪器做月维护,完成后再重新做FACSComp仪器指控。 打印报告，退出FACScomp软件。 4.4 样本检测程序 样本准备： 取TruCount Tube，编号。 用反向加样法在Tube中加入50ul充分混匀的抗凝全血，注意血不要碰到试管底部的微球（Beads）。 取20ul 荧光抗体加入到管中，注意：不要碰到血。涡旋混匀，室温避光放置15min。 取出加入450ul 1×FACS 溶血素，充分混匀，避光放置15min。 24小时内上机用MultiSET软件获取细胞进行检测，上机前应充分混匀。 上机操作: 执行FACSCalibur开机程序，进入MultiTEST软件。 在出现的“Sign in”窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息，单击“Accept”。 进入“Set up”窗口：在“Data Source”对话框中选择“From Cytometer: Acquisition and Analysis”，在“Entry Level File Name Prefix”中选择“Sample name”；在“Automatic Saving Options”中选择“Data File”、“Laboratory Report”、“Physician Report”，软