碱性磷酸酶Km值的测定说课讲解.pptVIP

碱性磷酸酶Km值的测定 ;【实验目的】; Vmax?[S] V= Km + [S] 其中Km为米氏常数， Vmax为最大反应速度， 当V=Vmax/2时，则Km=[s]。 Km是酶的特征常数，测定Km是研究酶的一种方法 ;将米氏方程变形为双倒数方程，以l/ v－1／[s]作图，将各点连线，在横轴截距为-／km，据此可算出Km值。 1/V=Km/ Vmax?[S] + 1/ Vmax ;本实验以碱性磷酸酶为例，用磷酸苯二钠为其底物，生成酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4一氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物，根据红色的深浅可测出酶活力高低。其反应式如下： 磷酸苯二钠+H2O AKP OH- 苯酚 苯酚+4-氨基安替比林 K3Fe(CN)6 醌衍生物 （红色）;管 号;酶液;碱性溶液;结果记录 ;2、作图;[S];比