分子生物学第一次讨论人类基因组DNA提取、限制性核酸内切酶切割的原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用.ppt

第一次讨论课 （2） 第3组 口腔1401班 原理 方法 注意事项 结果鉴定 人类细胞质RNA提取 原理 方法 RT-PCR的原理、方法 原理 结果分析 应用 琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用 人类细胞质RNA提取 真核细胞总RNA主要由rRNA（80-85%）、tRNA和核内小分子RNA(10-15%)、mRNA（1-5%）组成，其中rRNA、tRNA和mRNA位于细胞质中。 RNA提取实质就是将细胞裂 解，释放RNA，并通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质最终获得高纯度RNA产物的过程。 AAAAAA AAAAAA tRNA mRNA rRNA 人类细胞质RNA提取 RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。在分离RNA的过程中，用抑制剂以抑制RNA酶的活性。 RNA提取对样品的新鲜性要求非常高，获取样品后最好立即提取RNA，若无条件立即实验，应于-80℃或液氮中保存样品，取出样品后立即在低温下研磨裂解细胞，以防RNA降解。 建立一个无RNA酶的环境 Trizol法 * DEPC,焦碳酸二乙酯 RNA操作时最常用的RNase抑制剂，对核酸酶有很强的抑制作用。作用机制是与蛋白质中的活性基团组氨酸结合，使蛋白质变性。 使用方法：用来去除溶液中