酵母双杂交自激活.pptVIP

酵母双杂交(自激活) 真核生物的转录因子是由两个可以分开的、功能上相互独立的结构域(domain)组成的。 一、原理 酵母的转录激活因子GAL4，在N端有一个由147个氨基酸组成的DNA结合域(DNA binding domain,BD)，C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域(transcription activation domain,AD)。 GAL4分子的BD可以同上游激活序列(upstream activating sequence,UAS)结合。 AD则能激活UAS下游的基因进行转录。 单独的BD和AD都不能激活UAS的下游基因，它们之间只有通过某种方式结合在一起才具有完整的转录激活功能。 His, β-gal 一般情况下，单独的 BD 可以与 GAL4 上游活化序列（GAL UAS）结合，但不能引起转录。然而，将一段具有转录激活活性的转录因子基因构建到BD载体上，若其表达产生的 BD 单独与 UAS 结合也可以引起下游报告基因的转录，那么就称之为酵母双杂中的自激活现象。反过来，可以利用这种自激活现象来验证某个转录因子是否具有转录激活活性。 His, β-gal 自激活原理 Transcription factors GAL4BD YPDA 液体 500ml 固体 100ml 蛋白胨 10g 2g 酵母提取物 5g 1g 琼脂 —— 2g 0.