第三章物理图谱.pptVIP

物理作图的主要方法 限制性作图（restriction mapping) 荧光原位杂交（fluorescent hybridization,FISH) 序列标签位点（STS )作图 （ sequence tagged sites mapping) 限制性作图的基本原理 比较一种DNA分子被不同限制性内切酶切割所产生的片段大小。 首先用一种酶处理样品后，电泳确定DNA片段的大小。 然后用第二种酶处理，获得第二组片段。 最后用两种酶混合处理，获得第三组片段。 收集上述资料进行对比组装。 两种酶切位点交替出现的区段用加减法确定其的相对位置。 连续出现2个或多个相同酶切位点的区段，采用部分酶解法。 切点过多时可以采用末端同位素标记结合部分酶解进行绘图。 限制性作图的规模受限于限制性片段的大小 限制性片段越大，切点越多，需要比较的片段也会增加，而且当片段多到一定程度，一些大小相似的片段会重叠在一起，不可能组成一个清晰的图谱。因此，限制性作图更适合于小分子。 实际应用中如果DNA分子小于50kb，通常可以选用识别6个核苷酸序列的限制酶来建立清晰的限制性图谱。 选用稀有切点限制酶的注意事项 识别顺序越长产生的片段越大，但当识别位点含非特异顺序时，片段长度小于预期； 识别位点的碱基组成影响限制性片段的大小。高等生物基因组一般A/T比较高, 应选G/C 高比例限制酶