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PCR基本原理示意图 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ * 待扩增目的DNA片段（红色区域） 氢键 3’ 5’ 3’ 加热变性后氢键被破坏，模板分成两条单链。 5’ 5’ 3’ 3’ 加热变性 5’ 3’ 3’ 退火 （迅速降温） 退火后，由于引物分子小，浓度又高，在模板之间 还未复性前就迅速与模板匹配结合。 5’ 3’ 3’ 引物2 引物1 引物是人工设计并合成 的脱氧核苷酸短链。 5’ 3’ 3’ 引物2 引物1 升温至Taq酶最适温度 3’ 3’ 新链延伸方向 总是从5’ → 3’ 在Taq酶最适温度下，新链合成，不断延伸；在终止 延伸时，新链的长度可能长于目的片段，延伸至目的 片段外侧区域。 升温至Taq酶最适温度 在Taq酶最适温度下，新链合成，不断延伸；在终止 延伸时，新链的长度可能长于目的片段，延伸至目的 片段外侧区域。 5’ 3’ 3’ 引物2 引物1 3’ 3’ 5’ 5’ 新链延伸方向 总是从5’ → 3’ 变性温度下链间氢键又被破坏，双链分开成单链。 5’ 3’ 3’ 再次升温至变性温度 5’ 5’ 3’ 3’ 退火后，引物又与模板匹配结合。 5’ 3’ 3’ 退火 （迅速降温） 5’ 5’ 3’ 3’ 引物1 引物1 引物2 引物2 注意引物与模 板匹配的位置 在Taq酶最适温度下，新链合成，不断延伸。 新链的长度不会超过模板。 5’ 3’ 3’ 升温至Taq酶最适温度 5’ 5’ 3’ 3’ 引物1 引物1 引物2 引物2 5’ 新链延伸方向 总是从5’ → 3’ 反复经过变性、退火、延伸等步骤， 经过约30~40次循环，下面这种产物将 以指数级方式递增，成为主要产物。 5’ 3’ 5’ 3’ 难点？！！ *
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