耐寒常春藤嫩茎试管苗培养的研究.docVIP

PAGE PAGE 1 耐寒常春藤嫩茎试管苗培养的研究 　　摘要：为应用耐寒常春藤的有利性状，以嫩茎为材料，采用生根培养的方法，对其进行了生根培养、继代扩增培养以及移栽和移植的研究。结果表明：把无菌嫩茎的下部切口在浓度为10mg?L-1的IAA溶液中处理3min后，接种到1/2MS+蔗糖20g?L-1+NAA0.2mg?L-1～0.4mg?L-1的培养基上是耐寒常春藤无菌嫩茎生根培养的理想培养方法；把试管苗剪成具有侧芽或顶芽的茎段后，在1/2MS+蔗糖20g?L-1+NAA0.3mg?L-1的培养基上进行扩增培养是耐寒常春藤试管苗扩增培养的理想方法；试管苗移栽成活率在95%以上；定植2年后陆地越冬成活率在91%以上；试管苗保持了耐寒变异性状。 　　关键词：常春藤；耐寒；试管苗 　　中图分类号：S567.2文献标识码：B 　　文章编号：1674-9944（2013）01-0168-03 　　1引言 　　常春藤（Hederahelix）又称“洋常春藤”，是五加科常春藤属攀援常绿灌木植物[1]，原产于欧洲，主要进行观赏盆栽，是大连地区较为常见的盆栽美化植物。由于大连地区没有攀援常绿植物，有人曾试图把常春藤作为攀援常绿植物在大连地区进行试栽。但因其不耐寒，在大连无法越冬而导致试栽失败。在2005年1月（此时是大连地区每年最冷的季节），研究者在曾经试栽过常春藤的林旁发现了1株可以正常越冬，并且在冬季仍然枝叶翠绿的常春藤。之后，研究者又对这株冬季能正常越冬的常春藤进行了为期2年的观察，发现在大连连续3d为-11℃的气温条件下均未发生冻害。这证明这株常春藤是1株具有耐寒性的植株。在进行耐寒观察的同时，研究者还进行了扦插繁殖，但由于能用于进行扦插的枝条非常有限，只能繁殖出少量的试管苗，难以满足人们栽培中的的需求。于是，研究者从2007年5月开始，对其进行了茎段试管苗培养的研究。以期通过这种繁殖手段，达到快速繁殖、满足绿化栽培的目的。目前国内已有关于常春藤组织培养及快速繁殖的报道[2，3]，但未见关于耐寒性常青藤试管苗培养研究的报道。 　　2材料与方法 　　2.1实验材料 　　5月中旬，在生长于大连棒棰岛山坡林旁的耐寒常春藤嫩枝叶上喷洒浓度为30mg?L-1的庆大霉素溶液后，用塑料将其罩住，24h后，将具有生长点的嫩枝剪下，带回实验室，作为培养材料。 　　材料灭菌参见卢哓等大活再生系建立的研究[4]。培养条件参见陈旸升等千屈菜的组织培养及再生体系建立的研究[5]。 　　2.2实验方法 　　2.2.1嫩芽的生根培养 　　将无菌嫩枝切成至少具有2个侧芽或者1个侧芽和1个顶芽的茎段后，把切下的茎段下部切口在浓度为10mg?L-1的IAA溶液中处理3min后，将其接种到pH值5.8、以1/2MS+蔗糖20g?L-1为基本培养基，添加浓度各异的NAA、IBA的培养基上，进行具有顶芽或侧芽嫩茎段的生根培养试验。这一生根试验每种培养基接种30个茎段，重复2次。 　　2.2.2试管苗生根继代扩增培养 　　把具有顶芽或侧芽嫩茎段在1/2MS+蔗糖20g?L-1+NAA0.2mg?L-1～0.4mg?L-1这种培养基上生根培养35d的试管苗采用以下4种方法处理，进行生根继代扩增培养：一是在操作过程完全无菌的条件下，在培养瓶中把试管苗剪成具有2个侧芽或者具有1个顶芽和1个侧芽的茎段后，把茎段的下部切口在浓度为40mg?L-1的IBA溶液处理0.5h后，接种到1/2MS培养基上进行生根继代培养（以下简称为第1种方法）；二是在操作过程完全无菌的条件下，在培养瓶中把试管苗剪成具有2个侧芽或者具有1个顶芽与1个侧芽的茎段后，把茎段的下部切口在浓度为40mg?L-1的IAA溶液处理0.5h后，接种到1/2MS培养基上进行生根继代培养（以下简称为第2种方法）；三是在操作过程完全无菌的条件下，把培养的试管苗在培养瓶中剪成具有2个侧芽或者具有1个顶芽和1个侧芽的茎段后，接种到1/2MS+蔗糖20g?L-1+NAA0.3mg?L-1这种培养基上进行继代培养（以下简为称第3种方法）；四是向培养瓶内加入5～10mL浓度为20mg?L-1的IAA溶液处理4h后，在操作过程完全无菌的条件下，把试管苗在培养瓶中剪成具有2个侧芽或者具有1个顶芽和1个侧芽的茎段后，接种到1/2MS这种培养基上进行生根继代培养（以下简称为第4种方法）。生根继代培养试验进行了2次重复，每种方法接种培养120个材料。 　　2.2.3试管苗移栽与移植 　　6月上旬，把培养30d的生根试管苗培养瓶塞打开，放到温室中光照约4000lx的条件下炼苗3d左右，取出试管苗，直接移栽到装有1/2河沙与1/2园土的混合土的营养钵中。移栽后20d左右，在可见成活并开始正常生长时，将其移植到附近生长着爬山虎的山脚下。移栽和移植分别