植物分子生物技术-第3讲.pptxVIP

植物基因工程;第一节 植物基因的分类及结构功能;植物microRNA基因;;经典植物基因模型;密码子的偏好性;第二节 基因克隆的载体;理想克隆载体应具备的条件：;克隆载体------质粒;T-vector;其它基因克隆载体;第三节 基因克隆的工具酶;第四节 已知基因克隆的策略;目的基因获得之——化学合成法;目的基因获得之——基因文库法;基因文库的筛选;目的基因的获得之——PCR方法;PCR 错误;普通PCR的产物3’末端都有个突出A碱基； 高保真PCR产物无3’末端A;第五节 未知基因的克隆;3’RACE;Adaptor-Adding Method 原理;TdT 法原理;;;第六节 植物转基因方法简介;农杆菌法转基因;农杆菌法转化;;;农杆菌转化示意图;Ti质粒图谱;农杆菌TDNA转移的机理图示;毒性Ti质粒的“卸甲”;转化用载体;pCAMBIA1301图谱;转化用农杆菌的制备;;转化农杆菌方法;;烟草和水稻的农杆菌转化;拟南芥浸花转化法;影响农杆菌转化的因素;基因枪法转基因;基因枪转化法;两种基因枪;基因枪工作原理;基因枪的配套设备;影响基因枪法转化的因素;基因枪法的优点;;转基因中的“独立转化事件”;保留标记基因有哪些风险？ 食用安全性 抗生素基因的水平转移 影响多重基因转化;如何删除标记基因;混合菌侵染： 用两个农杆菌，其中一个只含有目的基因，另外一个只含有Marker基因，混合侵染。 双T-DNA载体： 目的基因和Marker基因在同一载体上，但是每个基因两边各有一对LB、RB边界序列。;李桂民，等，2004，分子植物育种;第七节 CRISPR/Cas9基因组编辑技术;CRISPR-Cas系统的结构;缩略词;CRISPR/Cas9来源;CRISPR/Cas9作用机制;CRISPR/Cas9 的应用;应用实例;CRISPR-Cas9技术仍然存在漏洞，如系统靶向要求较高，最主要的是PAM（Protospacer adjacent motifs-原间隔序列临近基序）必须为NGG（如-GGGCTC-、-GGCG-、-TGGCTT-等）。 Cas9核酸酶不仅会切断靶向基因，还有可能在非目标位点进行酶切，导致“脱靶”编辑，这也是现阶段影响CRISPR-Cas9技术应用的瓶颈之一。;思考： 1、CRISPR/Cas9基因组编辑系统外源基因的插入位点与编辑位点是否在基因组同一位置？ 2、CRISPR/Cas9定点编辑可以实现超表达吗？;争议中的NgAgo基因编辑技术;