线粒体测定最终版.docxVIP

提取方法： 10克鲜样加入40ml提取液用匀浆机搅10下左右，每次持续一秒钟。用4层纱布过滤后，3000g离心10 min去除完整的叶绿体和类囊体膜。上清液转移到新的试管中12000g离心15min。沉淀用洗涤液（8ml）进行悬浮后再次离心（12000g， 15min），弃上清，沉淀重新悬浮洗涤液中（毛笔中吸取的洗涤液即可）。得到的线粒体粗体液立即进行呼吸测定。 分析液 1. 配制提取液500ml（冰箱中的为2.5×的溶液） 50 mM HEPES-KOH （pH 7.5） 5.95775g 0.3 M 蔗糖 51.345g 2 mM EDTA, 0.29225g 10 mM NaCl 0.2922g 5 mM γ-己酸（可用正己酸替代） 0.2904 ml 10 mM 巯基乙醇 0.3906 ml 0.3％ BSA 使用前加入30 mM Na-AsA 每100ml加1.1167g Na-AsA。 2. 配置悬浮液500ml 20 mM HEPES-KOH （pH 7.5） 2.3831 0.33 M