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* 在无氧条件下 ①在乳酸菌中，受乳酸脱氢酶作用，丙酮酸作为受氢体而被还原为 乳酸，即为同型乳酸发酵 ②在酵母个，在丙酮酸脱羧酶作用下，丙酮酸脱羧生成乙醛， 后者在乙醇脱氢酶作用下，乙醛为受氢体被还原成乙醇，即酒精发酵 ③在梭状芽孢杆 菌中，丙酮酸脱梭生成乙酰CoA。然后经一系列变化生成丁酰CoA、丁醛，两者作为受氢体被还原为丁醇。生成物还有丙酮、乙醇，称为丙酮丁醇发酵 一、糖嫌气性发酵产品 第十二章 工业微生物发酵产品 调节点主要在三个激酶，即己糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶。它们是糖酵解途径中的关键酶，是糖酵解途径的三个不可逆步骤 糖代谢的调节主要是能荷的控制 能荷 = ATP ATP抑制磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的活性，使酵解减少 当需能反应加强，ATP分解为ADPI和AMP ATP ADP、AMP增加、ATP的抑制作用被解除，同时ADP、AMP激活已糖激酶和磷酸果糖激酶 乙醇生成机制 在好气条件下，酵母发酵能力降低（呼吸抑制发酵） 巴斯德效应 能荷调节 甘油为合成机制 酵母在一定条件下培养，可以利用糖分生成甘油 酵母的第二型发酵 加入亚硫酸氢钠，与乙醛起加成作用 生成难溶的乙醛亚硫酸氢钠加成物 酵母的第三型发酵 当酵母在碱性条件(pH 7.6)进行发酵，二个分子 乙醛起歧化反应，相互氧化还原，生成等量的乙醇和乙酸 二、柠檬酸发酵 主要生产菌： 黑曲霉 黑曲霉糖质发酵柠檬酸 证明生产菌（黑曲霉）中80%的糖代谢走EMP途径 生产菌中存在TCA的酶系，故有TCA存在 草酰乙酸的来源不是由TCA供应，而是由2个CO2固定提供，故CO2固定对柠檬酸合成必不可少。 由于不存在苹果酸脱氢酶 丙酮酸羧化酶 PEP羧激酶 生物合成途径（无碳原子损失） 理论转化率：106.7% C6H8O7 H2O理论转化率：116.7% 能量平衡 EMP中底物水平磷酸化 2ATP EMP途径 2NADH 丙酮酸氧化脱羧 2NADH 可以满足生产菌的维持能量消耗， 不需要消耗C源经TCA来产能 柠檬酸合成的代谢调节 第一个调节酶是磷酸果糖激酶（PFK） Δ 柠檬酸和ATP对该酶有抑制 生产菌需要解除该抑制作用 AMP、无机磷以及NH4+对该酶有活化作用 NH4+有效解除柠檬酸和ATP对该酶有抑制 ，故生产上通过添加铵盐来提高柠檬酸产量 Δ Mn2+的影响： Mn2+缺乏 菌体的TCA酶活下降 Mn2+缺乏 可能干扰蛋白质合成，导致蛋白质分解 NH4+水平升高 减少柠檬酸对该酶的抑制 第二个调节点：CO2固定的酶活力高，保证草酰乙酸的供应 第三个调节点：TCA环上调节 柠檬酸合成酶： 许多细胞中该酶是TCA的调节酶，但在黑曲霉中此酶无调节作用 顺乌头酸水合酶： 理论上此酶失活 TCA环阻断 积累柠檬酸 顺乌头酸水合酶需要Fe2+ 故在发酵液中添加黄血盐络合Fe2+阻断TCA环，积累柠檬酸 黑曲霉乌头酸水合酶存在于线粒体中，它催化的反应存在着柠檬酸：异柠檬酸：顺式乌头酸 = 90：7：3的平衡关系； 黑曲霉对辅酶NAD+专一性的异柠檬酸脱氢酶活力很低，却有三种依赖于辅酶NADP+的异柠檬酸脱氢酶，其中的两种与存在于线粒体的酶及TCA循环有关，它们受到生理浓度柠檬酸的抑制。 为什么在A. nigar中异柠檬酸不会进一步分解及柠檬酸的积累机制？ 三、谷氨酸的发酵 1.谷氨酸生产菌中存在2个糖酵解途径EMP/HMP 生物素参与糖代谢作用：增加糖代谢的速度 而丙酮酸氧化脱羧的速度未改变 丙酮酸积累 乳酸积累 2.α-酮戊二酸脱氢酶缺失 TCA环阻断， α-酮戊二酸积累 3.四碳二羧酸的来源 Δ在生产菌中检出CO2固定反应酶活性 磷酸烯醇丙酮酸(PEF)羧化酶和苹果酸酶 谷氨酸对糖的转化率达到81.7% Δ DCA循环 标志酶：异柠檬酸裂解酶 在谷氨酸发酵中，DCA环一方面可以作为TCA循环有缺陷时C4二羧酸的补充 在谷氨基酸生产菌的生长中提供能量 作用 谷氨酸生成期中要封闭DCA环？ 通过DCA环提供C4二羧酸时谷氨酸对糖的转化率仅为54.4% 4.异柠檬酸脱氢酶活力强 提供NADPH,用于还原α-酮戊二酸生成谷氨酸，形成氧化还原共扼体系 5.氨的导入 合成谷氨酸的反应有3种： α-酮戊二酸 + NH4+ NADPH + 谷氨酸 H2O NADP + + 谷氨酸脱氢酶 α-酮戊二酸 + 天冬氨酸或丙氨酸 谷氨酸转氨酶 谷氨酸 α-酮戊二酸 + α-酮戊二酸 + 谷氨酰胺 NADPH + 2谷氨酸 NADP + 谷氨酸合成酶 生产菌中 谷氨酸转氨酶活力低，转氨作用可以不考虑 谷氨酸合成酶由于不受高浓度谷氨酸抑制，其作用值得重视 谷氨酸脱氢酶是合成积累谷氨酸的主要酶 氨的导入时 生物素缺乏， NH4+影响糖代谢速