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外源基因在真核细胞中的表达 人们合成与生物相关的物质是从尿素开始的，1828年，德国化学家维勒人工合成了存在于生物体的这种有机物。 在1960年我国科学家采用化学方法首次成功地合成了具有生物活性的蛋白质——胰岛素。 随着内切酶的发现和基因工程技术的发展，人们发现用各种不同的载体在原核、真核系统中进行蛋白表达更为行之有效。 而这其中大肠杆菌表达系统发展得最为迅速、成熟。原核表达具有操作方便、快捷，需时较短，表达量大，适合工业化生产等优点。 真核表达载体至少要含两类序列： ①原核质粒的序列，包括在大肠杆菌中起作用的复制起始序列、能用在细菌中筛选克隆的抗药性基因标志等，以便插入真核基因后能先在很方便操作的大肠杆菌系统中筛选获得目的重组DNA克隆、并复制繁殖得到足够使用的数量。 ②在真核宿主细胞中表达重组基因所需要的元件，包括启动子、增强子、转录终止和加poly-A信号序列、mRNA剪接信号序列、能在宿主细胞中复制或增殖的序列，能用在宿主细胞中筛选的标志基因、以及供外源基因插入的单一限制性内切酶识别位点等。 第一节外源基因在毕赤酵母中的表达 酵母是目前最常用的表达系统之一。 优点：成长快，易培养，成本低，遗传操作方便，能进行翻译后加工和修饰 巴氏毕赤酵母（Pichia pastoris）用于基因工程表达外源蛋白的优点：发酵密度高；外源基因表达量高； 可以建立有效的分泌型表达；（