单倍体细胞培养教学文案.pptVIP

单倍体细胞培养; 一、引言; 根据物种倍性不同，单倍体可以分为两大类：一类是一倍单倍体,即二倍体物种产生的单倍体；另一类是多倍单倍体,即起源于多倍体物种（如4x、6x）。 二倍体(diploid )植物其单倍体（haploid）即一倍体（monoploid ） 如， 玉米 2n = 2x = 20 n= x = 10； 水稻 2n = 2x = 24 n= x = 12 四倍体(tetraploid)植物其haploid为dihaploid 如，马铃薯 2n = 4x = 48， n = 2x = 24 六倍体(hexaploid)植物其haploid为triploid 如，普通小麦2n = 6x = 42， n = 3x = 21 八倍体(octoploid)植物其haploid为tetraploid 如，草莓 2n = 8x = 56 ，n = 4x = 28 ;单倍体植株特点： ;; 体内发生： 体内发生 即从胚囊内产生单倍体。这包括： 雌核发育：精子虽然正常地钻入和激活卵子，但精子的细胞核并未参与卵球的发育，精子的染色体很快消失，胚胎的发育仅在母体遗传控制下进行 雄核发育：卵子与正常的精子受精，进入卵子内的精子染色体加倍，发育为完全为父本性状的二倍体 ;（1）人工诱导雌核发育的方法;（2）人工诱导雄核发育的方法; 离体诱导： 植物细胞具有潜在的再生性和全能性,能发育为完整植株，故应用组织培养技术对特定组织进行离体培养，可诱导产生单倍体。方法如下： A、花药和花粉培养 B、未受精子房及卵细胞培养 ;1、概述 概念 花药培养: 把发育到一定阶段的花药接种在人工培养基上,使其发育和分化成为植株的过程. 花粉培养(小孢子培养): 从花药中分离出花粉粒,使之成为分散的或游离状态,通过培养使花粉粒脱分化,进而发育成完整植株的过程. ;2、花药或花粉培养在作物育种中的作用：; 二倍体供体植株基因型为AaBb，若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 常规方法： AAbb出现的概率为1/16，并且不能将AAbb与Aabb、aAbb区分开。 ; 二倍体供体植株基因型为AaBb，若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 单倍体方法： AAbb出现的概率为1/4。; 植株不受显隐性的影响，在诱变育种中能在当代及时获得突变个体，加倍后成为稳定的纯系。利于筛选隐性突变体 提高诱变效率。 ;花 药 的 结 构 及 花 粉 管 的 形 成;3、花药和花粉培养中雄核发育的途径;※ B途径 小孢子第一次有丝分裂为均等分裂，形成大小相近的两个细胞。然后由这两细胞连续分裂形成单倍体植株，或者核融合形成多倍体植株。 ;4、花药培养与花粉培养的异同点;;花药培养;1、研究历史： 首先报道通过花药培养获得单倍体植株成功的是印度学者Guha和Maheshwari (1964, 1966)。 花药培养获得单倍体的技术途径已在禾本科作物、茄科作物、十字花科作物的育种中广泛应用。 ※ 我国花药培养工作虽然开始较晚，但在短短的时间内取得了可喜的进展，1974年中国农科院植物研究所和中国农业科学院烟草研究所，仅仅用了三年的时间，就培养出世界上第一个作物新品种---单育1号烟草品种。 ;2、花药培养的基本程序： ; 选择花药时，一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 最常用的方法有醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 ;花药预处理 大量试验结果表明，花药培养前给予一定的低温处理是十分必要的。 ; 花药培养常用的基本培养基： N6：高硝态氮，低铵态氮，广泛用于禾本科植物的花药培养 B5、MS、White、Nitch 等。 C17（王培等，1986）：适于小麦花药培养，提高 出愈率。;?花药培养的意义 1.同常规的育种方法相比，利用花药培养可以大大缩短育种年限。2.利用花药培养的单倍体育种较常规育种便于根据表现型进行选择。3. 单倍体加倍的纯度，较常规的自交选育出来的自交系纯度要高的多。 4.对于自交不亲和的物种可以获得杂交种子。5.在远源杂交方面具有较大的利用价值。;花粉培养;1、取材时期：四分体时期到单核早期。 2、花粉的分离： 3、小孢子纯化： 对获得的小孢子混合物进行分级过筛、梯度离心处理纯化小孢子 4、花粉的培养 ;材料的准备： 1）自然散落法(漂浮培养自然释放法) ： 将花药接种在预处理液或液体培养基上，待花粉自动散落后，收集培养。 2）机械游离法 a.磁