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第二章 工业微生物菌种基础知识 第一节 工业微生物菌种选育 一、工业微生物常用菌种 1、细菌 短杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌等 2、真菌 酵母菌、霉菌 3、放线菌 产生各种抗生素的放线菌、灰色放线菌 霉菌：曲霉属、青霉属。 黑曲霉：柠檬酸工业、酿酒业、酶制剂工业（糖化酶） 黄曲霉：生产酱油用的3042、面酱 青霉菌：青霉素生产 红曲霉：红曲制造，女儿红酒，豆腐乳生产的赤霉菌， 酵母菌 啤酒酵母：啤酒酿造、辅酶类物质发酵 酒精酵母：酒精液体发酵 汉逊酵母；产生白酒香味物质 假丝酵母：SCP生产、石油发酵 藻类：保健品中螺旋藻生产 二、 工业化菌种的要求 能够利用廉价原料、简单培养，大量合成产物 合成产物途径尽可能简单 遗传性相对稳定 不易感染噬菌体 生产特性要符合工艺要求 商品化生产菌介绍 1、抗生素生产菌 放线菌：链霉素、四环素、红霉素 真菌：青霉素、头孢 2、氨基酸生产 氨基酸发酵为代表的代谢控制发酵是发酵工业的一个转折点。 代谢控制发酵：用人工诱变方法，有意识的改变微生物代谢途径，最大限度地积累产物。 氨基酸生产菌要求： 代谢途径清楚、简单。 谷氨酸发酵菌种：棒杆菌属，短杆菌属、节杆菌属或小杆菌属的棒型细菌 其他氨基酸生产菌：常规菌种也可以由谷氨酸生产菌选育而成；工程菌，大肠杆菌，枯草芽孢杆菌 3、食品酶制剂生产菌 开发一个新酶需要一系列毒理试验，食品用酶，美国需要FDA批准，目前只有少数微生物用于食品酶的生产。 常见的有α-淀粉酶产生菌：黑曲霉、米曲霉、米根霉、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌。 三、工业微生物来源 （一）生产菌种来源： 根据资料直接向有关科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏中心索取和购买。 （二）从自然界分离纯化新的微生物菌种。 国内菌种保藏机构： 1、普通微生物菌种管理中心（CCGMC） 中科院微生物研究所 武汉病毒研究所 2、农业微生物保藏中心（ACCC）、中科院土壤肥料所 3、工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）,中国食品发酵工业科学研究院。 4、医学微生物菌种保藏中心 5、抗生素菌种保藏管理中心 6、兽医微生物菌种保藏中心 菌种自然界分离 1、分离思路 2、新种分离与筛选步骤 3、培养分离原则 4、生产选种 1、分离思路 新菌种分离是从混杂各类微生物中依照生产要求、菌种特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所要的菌种挑选出来。 实验室或生产菌种若染杂菌，也必须重新分离纯化。 良种具备，还要有合适工艺条件和合理设备。 2、新种分离与筛选步骤 定方案：首先查阅文献，了解所需菌种培养生长特性。 采样：有针对性地采样 增殖：人为控制养分或培养条件，使目的菌种在增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：对分离菌种进行生产性能测定。包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 采样 1、采样对象 以采集土壤为主，一般是菜园土或耕作土。以细菌和放线菌为主。富含糖分和沼泽地中，酵母和霉菌多，像一些野果生长区或果园里。也可以是植物、腐败物、或水体等。 2、采集季节：温度适中，雨量不多的秋初 3、采土方式：选好地点，用小铲出去表土，取离地面5-15cm处土约为10g，放入自封袋中，标记好采集时间、地点、环境等，以备查考。一般采集后及时分离保证微生物量和种不变。 增殖培养 物理处理方式：加热、膜过滤 为使目的菌容易分离，可以通过选择性培养基，选择一定培养条件控制。 例如：利用碳源差异，选糖、淀粉、纤维素或则石油，利用唯一碳源就可以被保留下来，其他则死亡。 富集目的：筛选变成可能，目的菌占优势。 培养分离 增殖培养效果显著，但目的微生物还在混杂生长，必须进一步纯化分离。 纯种分离方法有划线分离，稀释分离法。 筛选 1、从产物角度 通过培养，依据在设计的培养基上形成目的产物，利用简单、快速鉴定方法，入抗生素 采用与生产相近培养基和培养条件，在三角瓶中小型发酵实验，以得到适合工业生产用菌种。 2、形态角度 菌落外观形态是微生物一个重要表征。产多糖菌在培养基上生长时可以产生粘液的菌落外观。 毒性试验 自然状态下，一些微生物在一定条件下产生毒素，在把其作为食品工业食用菌时，依据国家规定，除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌无需做毒性试验外，其他微生物均要做2年以上毒性试验。 实例：碱性纤维素酶产生菌的筛选 文献：产生菌为中性芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、放线菌及霉菌 采样（造纸厂）——80℃30min处理 四、菌种选育 目的：防止菌种退化；解决生产实际问题；提高生产能力；提高产品质量；开发新产品 内容：根据菌种自然变异而进行自然选育，以及人工方法引起菌株变异或形成新的杂种，再按照工业生产要求