沉淀和结晶专题知识讲座课件.pptVIP

沉淀和结晶;沉淀法;2. 1基本概念： 盐析：在高浓度的中性盐存在下，蛋白质（酶）等生 物大分子物质在水溶液中的溶解度随盐浓度的升高会 急剧下降，并产生沉淀，这种现象称为盐析。;;2.3.1离子强度对盐析过程的影响;β－盐浓度为0时，蛋白质溶解度的对数值。与蛋白质种类、温度、pH值有关，与盐无关； Ks—盐析常数，与蛋白质和无机盐的种类有关，与温度、pH值无关。;Ks盐析法(分级沉淀）：在一定pH和温度下，改变体系离子强度进行盐析的方法； β盐析法(分级沉淀） ：在一定离子强度下，改变pH和温度进行盐析； 其中，Ks盐析法由于蛋白质对离子强度的变化非常敏感，易产生共沉淀现象，因此常用于提取液的前处理。 而β盐析法由于溶质溶解度变化缓慢，且变化幅度小，因此分辨率更高，常用于初步的纯化。;2.4.1选用盐析用盐的几点考虑 ;2.4.2一般的规律为 在相同离子强度下，盐的种类对蛋白质溶解度的影响有一定差异： 半径小的高价离子的盐析作用较强，半径大的低价离子作用较弱 （Ks）磷酸钾硫酸钠硫酸铵柠檬酸钠硫酸镁;2.4.3常用的盐析用盐;2.5影响盐析的因素;2.6硫酸铵盐析操作;25℃硫酸铵水溶液由原来的饱和度达到所需饱和度时，每升硫酸铵水溶液应加入固体硫酸铵的克数;（2）加饱和硫酸铵溶液;3 有机溶剂沉淀;（3）加有机溶剂后，pr等分子的空间结构可能发生变化，使内部疏水基团部分外露，并与有机溶剂的疏水基团结合成疏水层，从而使蛋白沉淀。;3.4有机溶剂沉淀的特点;3.5常用的有机溶剂沉淀剂;3.6影响有机溶剂沉淀的主要因素;4.等电点沉淀;Date;操作时的注意事项： （1）由于无机离子的影响，蛋白质的等电点通常会发生“漂移”，阳-高，阴-低 （2）溶质的稳定性 （3）由于在等电点附近，溶质仍然有一定的溶解度，等电点沉淀法往往不能获得高的回收率，因此等电点沉淀法通常与盐析、有机溶剂沉淀法联合使用;5.其它沉淀法;1.结晶的概念 溶液中的溶质在一定条件下，因分子有规则的排列而结合成晶体。 特征：晶体的化学成分均一，具有各种对称的晶体，离子和 分子在空间晶格的结点上呈规则的排列. 固体有两???状态：结晶和无定形 结晶：析出速度慢，溶质分子有足够时间进行排列，粒子排列有规则 无定形固体：析出速度快，粒子排列无规则 ;典型的晶体结构;2.结晶操作的特点;3.结晶过程分析;3.2凯尔文（Kelvin）公式;3.3结晶过程的实质;3.4 晶体的形成;4.结晶步骤;4.2温度与溶解度的关系;4.3饱和曲线和过饱和曲线;（1）稳定区和亚稳定区;（2）不稳定区;（3）影响溶液过饱和度的因素;4.4过饱和溶液的形成;（2）部分溶剂蒸发法 a.适用于溶解度随温度降低变化不大的体系，或随温度升高溶解度降低的体系； b.减压或常压蒸馏 如：灰黄霉素的丙酮萃取液，真空浓缩除去部分丙酮后即可有晶体析出。;（3）真空蒸发冷却法 a.使溶剂在真空下迅速蒸发，并结合绝热冷却，是结合冷却和部分溶剂蒸发两种方法的一种结晶方法。 b.设备简单、操作稳定;（4）化学反应结晶 a.利用化学反应产生一个更低可溶性的新物质，该新物质的浓度超过饱和溶解度，即有晶体析出； b.方法:加入反应剂或调pH 如：红霉素醋酸丁酯提取液中加入硫氰酸盐，并调pH5.0，即生成红霉素硫氰酸盐析出。;（5）解析法;4.5晶核的形成;4.6晶核的成核速度;5. 常用的工业起晶方法;晶种起晶法： 将溶液蒸发后冷却至亚稳定区的较低浓度，加入一定量和一定大小的晶种，使溶质在晶种表面生长。 该方法容易控制、所得晶体形状大小均较理想，是一种常用的工业起晶方法。 ;6. 影响晶体生长速度的因素;7. 提高晶体质量的方法;d.溶液温度－稍高 （i）T高，成核速度小于晶体生长的速度（粗大） （ii）T低，成核速度大于晶体生长的速度（细小） （2）影响晶体形状的素： 过饱和度、改变溶剂体系、杂质 如：普鲁卡因青霉素在水中结晶得方形晶体；在乙酸丁酯中得到棒状晶体 （3）影响晶体纯度的因素： 母液中的杂质、结晶速度、晶体粒度及粒度分布;8. 重结晶;重结晶的操作过程;9.结晶得一般方法