作用机理.影响因素培训课件.ppt

ATCase ATP + ATCase(天冬氨酸转氨甲酰酶)所催化的反应 氨甲酰磷酸 天冬氨酸 CTP - UTP UMP 氨甲酰天冬氨酸 E.coli的ATCase的亚基排列 催化(C)亚基（catalytic subunit） 调节(R)亚基（ regulative subunit） ATCase变构效应的动力学特征 ATP（正效应剂） CTP（负效应剂） 低催化活性构象 T(tense) - 态 C C C C C C R R R R R R C C C C C C 高催化活性构象 R(relax) -态 R R R R R R Vmax 1/2Vmax Km 8、Ribozyme 核酶 Ribozyme是一种RNA生物催化剂 Ribozyme的发现：RNA具有酶的催化功能是由Cech T.R于1982年提出的。1981年，发现四膜虫（tetrahymena thermophila）的26S rRNA前体在成熟过程中，其居间序列通过剪接反应被除去。并证明四膜虫rRNA前体的居间序列核糖核酸（L-19RNA）具有多种催化功能，将这种具有催化活性的RNA称为 Ribozyme (ribonucleic acid enzyme)。获得1989年诺贝尔化学奖。 rRNA基因的转录产物即rRNA前体（大约6400个核苷酸残基）很不稳定，在鸟苷和Mg2+存在下切除自身的内含子（intron或intervening sequence,IVS-居间序列或间插序列），使两个外显子(exon)拼接起来，形成成熟的rRNA_——此过程没有任何蛋白质酶参与，称为自我剪接（self-splicing）,并证明RNA具有催化活性。 四膜虫rRNA成熟中RNA的剪接示意图 Ribozyme在一定条件下，高度专一地催化下列反应，具有相应酶的活性（底物专一、符合米氏方程、对竞争性抑制剂敏感） 1.核苷酸转移酶活性 2CpCpCpCpC?CpCpCpCpCpC+CpCpCpC 2.磷酸二酯酶活性 CpCpCpCpC ?CpCpCpC+Cp 3.磷酸转移酶活性 CpCpCpCpCpCp+UpCpU ?CpCpCpCpCpC +UpCpUp 4.RNA限制性内切酶活性 另外，1997年，Zhang和Cech证明了人工合成的RNA分子具有肽基转移酶活性。 Ribozyme发现的重大意义： RNA具有酶的催化活性，向酶的化学本质是蛋白质这一传统概念提出了挑战。 在理论上，对于生物起源和生命进化的研究具有重要启示。 生物催化分子进化的可能性： RNA RNA-蛋白质 蛋白质-RNA 蛋白质-辅酶或辅基 蛋白质 在实践上，由于Ribozyme的内切酶活性，可定点切割mRNA，破坏mRNA，抑制基因表达，为基因、病毒和肿瘤治疗提供了可行途径。 酶与底物的中间络合物学说（Henri和Wurtz） 两个假设： E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应即 V＝k3[ES]。 S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S]＝[St]。 E + S k1 k2 k3 ES E + P 中间产物 抑制作用的机制： 6. 抑制剂对酶反应速度的影响 1.抑制剂与酶结合成极稳定的络合物，从而减低或破坏酶的活性。 2.破坏酶或辅基的活性基团或改变活性部位的构象。如重金属Ag+、Hg2+和类金属As3+破坏SH 3.夺取酶与底物结合的机会，从而减少酶的作用。（竞争性抑制剂） 4.阻抑 反应的顺利进行（反馈抑制） S + E ES E + P Vmax的意义 Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度成正比。 Vmax=K3 [E]，如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算酶的转换数，即动力学常数K3。 酶的转换数(turnover number):当酶被底物充分饱和时，单位时间内每个酶分子催化底物转变为产物的分子数。 酶的转换数可用来比较每单位酶的催化能力 １.需要金属的酶分类： 　（1）金属酶－metalloenzyme:含紧密结合的金属离子。如Fe2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+、Mn2+ 　　（2）金属-激活酶（metal-activated enzyme）:含松散结合的金属离子，如Na+ K+ Mg2+ Ca2+ 2.金属离子的作用： 许多氧化-还原酶中都含有铜或铁离子，它们作为酶的辅助因子起着传递电子的功能。 许多激酶的底物为ATP-Mg2+复合物。 金属离子通过水的离子