第五章植物脱毒快繁技术幻灯片资料.pptVIP

第五章、植物离体脱毒快繁技术 ; 目前，对细菌和真菌侵染的病害，可通过药物处理达到治愈的目的。但还没有治病毒的特效药。种子一般不带病毒(豆类植物除外)，种子繁殖可得无毒植株。但对于无性繁殖植物，必须采取一些特殊方法脱除病毒。; 脱毒快繁的一般过程 1、诊断：首先了解供试材料感染病毒的种类 2、茎尖培养脱毒或结合热处理 3、鉴定 4、繁殖 5、驯化移植; 1、热处理脱毒原理： ①病毒进入植物细胞后，随植物细胞DNA一起复制。热处理并不???杀死细胞，只是钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去病毒的侵染能力。 　　②热处理是一种物理效应，可加速植物细胞分裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优势，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因此加速分生组织细胞的分裂，能够获得无病毒植株。 ;(1)温汤浸渍处理 ;（1）温水浸渍处理??? 适用于休眠器官，在50℃左右的温水中浸渍10min至数小时，方法简便易行，但易使材料受伤。???;（2）热空气处理?? 热空气处理对活跃生长的茎尖效果较好。将生长的盆栽植株移入温热治疗箱内，一般35-40℃。处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。;　　热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊花等植物。如：葡萄置于38 ℃可去除扇叶病毒。 　　热处理对葡萄扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹果花叶病毒等球形病毒有作用，而对另一些病毒不起作用，因此，必须与茎尖培养相结合脱毒效果更好。;; 植物的去病毒技术，实质上就是采取不含病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm 带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。; 1、茎尖培养脱毒原理?? 病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm）几乎不含或含病毒很少。 ; 1、传导抑制。植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖细胞不断分裂和活跃的生长速度。 2、酶缺乏。茎尖中缺乏病毒合成所需的酶系，存在高水平内源激素，可抑制病毒的增殖。 ;3、能量竞争。当植物细胞分裂DNA复制时，病毒DNA随着复制。因此，植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。在旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很高，正常核蛋白合成占优势，使病毒无法进行复制。 4、抑制因子存在。在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”（抑制因子假说），在分生组织中的活性最高，因而使分生组织不受侵染。;2、培养基??? 一般以White、MS为基本培养基，提高钾盐和铵盐含量有利于茎尖生长。MS培养某些植物茎尖时，有些离子浓度过高应稀释。 　　在双子叶植物中，激素可能在第2对叶原基中合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给，必须加入生长素与细胞分裂素，浓度要合适。在生长素中应避免用易促进愈伤组织化的2，4-D，宜用NAA或IBA；细胞分裂素用KT或BA；GA3对某些植物茎尖培养有用。;材料选择、消毒 微茎尖的剥取 接种;3、茎尖的培养方法??? 需要一台解剖镜（8-40倍）。 剥离茎尖要迅速并尽快接种，或在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，以防茎尖变干。 茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细解剖，(无须表面消毒)就可得到无菌的外植体。有时消毒处理会增加培养物的污染率。 　　即：叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只须75%酒精中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽，如香石竹、马铃薯等，则要用0.1%次氯酸钠表面消毒10min。;茎尖长（ｍｍ）;; 剥取茎尖过程: 解剖镜下用解剖针将叶片剥掉，解剖针要常消毒。当一个半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将带1-2个叶原基的分生组织切下，接到培养基上。??? 将接种的茎尖置于22℃左右温度下。 2000-3000lx 16h/d 光照下培养。由于在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。微茎尖需数月才能成功。; 茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器官的培养相同。 茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径。;4、影响微茎尖成活及脱毒的因素?? （1）母体材料病毒侵染程度