3-13口七核酸结构.ppt

增色效应机理： 核酸变性时由分子内氢键破坏，2条核苷酸链解开，原来重叠在分子内部的碱基得以暴露，导致变性DNA260nm紫外线吸收值发生升高的现象。 核酸变性 熔解温度 （变性温度，Tm ） DNA加热变性，其260nm紫外线吸收值达最大吸收值一半时的温度 Tm值与CG含量成正比 Tm范围：85-950C Tm值与DNA溶液中离子强度成正比 （DNA样品不易保存在纯水中） 熔解温度（melting temperature) 核酸复性 适当条件 变性DNA 双螺旋DNA (两条单链) 退火（annealing) 缓慢冷却(Tm-25℃) 热变性DNA 双螺旋DNA 影响因素： DNA浓度---DNA浓度高，复性快 DNA分子---DNA分子大，复性慢 温度------温度高，易变性 温度低，易错配 2、复性（renaturation） renaturation denaturation 3、杂交（hybridization） 具有互补序列的、两条不同来源的单链核 酸分子，按碱基配对原则结合在一起，生成新 的DNA-DNA、RNA-RNA、DAN-RNA双链的过程。 是分子生物学研究中常用的技术之一。 杂交 不同种类DNA单链/RNA 碱基配对 适宜条件 杂化双链 (DNA-DNA/DAN-RNA/RNA-RNA) 应用 研究基因的位置 鉴定两种核酸的相似性 检测某些专一序列在待检样品中存在与否： 基因芯片 常用的杂交方法 Southern印迹法 Northern印迹法 原位杂交 Chip technology allows detailed comparisons of related animal cells to determine (for example) the differences in expression between a normal cell and a cancer cell. 第一次折叠 核小体 DNA整体体积减少6倍 第二次折叠 纤维状、襻状结构 DNA致密度增加40倍 第三次折叠 柱状结构 DNA致密度增加1000倍 1cm长的DNA分子压缩 直径数微米的细胞核 DNA在真核生物细胞核中的组装 三、基因与基因组 基因 gene 编码有功能的多肽链或合成RNA所必需的全部核酸序列 DNA：编码序列+非编码调节序列+内含子 cDNA：翻译调控序列+编码序列 基因组 genome 一个细胞或病毒所携带的全部遗传信息或整套基因 病毒： 一个核酸分子的碱基序列 原核生物：一条染色体的碱基序列 真核生物：一个单倍体细胞内所有的染色体 人23条染色体的碱基序列 一个病毒含一种核酸 DNA病毒 RNA病毒 重叠基因 同一段核酸序列由于密码阅读框架 的不同可翻译出几种不同的蛋白质 病毒基因组 DNA为环状双链 调节序列+编码序列+间隔序列 操纵子 操纵子= 启动序列+操纵序列+其他调节序列+结构基因 原核生物基因组 DNA为线性 人类基因组3×109bp 分隔基因 外显子(exon)+内含子(intron) 单拷贝序列 低度重复序列 中度重复序列 高度重复序列 卫星DNA 真核生物基因组 四、各类RNA的高级结构 二级结构 线性单链局部双螺旋（发夹结构） A=U、G C 三级结构 具备活性 四级结构 RNA+蛋白质=RNP 功能 参与蛋白质合成 识别密码子 转运氨基酸 一级结构 单链多核苷酸 含有稀有碱基 二级结构 三叶草型（四环四臂） 反密码环--含反密码子 氨基酸臂--携带氨基 3’端：-CCA-OH 三级结构 倒Ｌ型 tRNA的结构 可变环--其大小作为tRNA分类的标志 与核糖体5sRNA相互作用 识别密码子 携带氨基酸 功能 参与蛋白质合成 遗传信息的传递 原核生物mRNA 多顺反子 转录后不需加工，直接翻译成蛋白质 转录、翻译过程偶联 真核生物mRNA 单顺反子 细胞核内转录后需加工成熟mRNA 细胞质翻译成蛋白质 mRNA的结构 多顺反子 含有几个功能相关的蛋白质编码序列 可翻译成几种蛋白质 间隔序列：和核糖体识别、结合有关 ５’端：翻译起始相关序列 SD序列 ３’端：翻译终止相关序列 原核生物mRNA结构特点 单顺反子 一个mRNA分子包含一条多肽链的信息 初级转录物 核内不均一ＲＮA （heterogeneous nuclear RNA,hnRNA） 外显子+内含子 概念：真核生物ＤＮＡ转录生成mRNA时 的初