植物基因组DNA提取.ppt

6.吸取700ul上清液到一个新的1.5ml离心管中，加 入等体积氯仿溶液，颠倒混匀室温下静置1 min，使水相和有机相分层。 7.室温下12000rpm离心5 min。 8.吸取600ul上清液加入等体积的异丙醇，上下颠倒充分混匀，观察絮状沉淀，后12000rpm离心5min。 9.倒去上清后用70%的乙醇清洗两次，每次在12000rpm下离心1min。空气中干燥，后加入30ul的TE（或ddH2O）缓冲液，充分溶解。 10.DNA用于后续实验研究或放于-20 ℃保存备用。 * * 实 验 一 植物基因组DNA的提取 一、实验目的： 1. 了解真核生物基因组DNA提取的一般 原理。 2. 掌握DNA提取的方法和步骤。 二、一般原理 提取DNA的一般原理，是将分散好的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：异戊醇抽提的方法去除蛋白质，得到的DNA经乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。 三、材料 玉米叶片 四、设备  移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5 mL 离心管。 五、试剂 提取缓冲液： 100mmol/L Tris·Cl，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。 氯仿：异戊醇：乙醇（80：4：16）。 TE缓冲液：10mmol/L Tris·Cl（pH8.0），1mmol/L EDTA（pH8.0）。 其他试剂：液氮，异丙醇，无水乙醇，70%乙醇，3mol/L NaAc（pH5.2）。 六、操作步骤 在1.5ml离心管中加入1ml提取缓冲液，60℃水浴预热。 取玉米幼叶0.1g，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中，摇动混匀，60℃水浴保温3min，每隔一分钟摇动一次。 12000rpm 离心1min。 吸取900ul上清液到一个新的1.5ml离心管中，加入600ul的氯仿：异戊醇：乙醇（80：16：4）溶液，颠倒混匀室温下静置1 min，使水相和有机相分层。 室温下12000rpm离心5 min。 思考题: 　　1. 为什么构建DNA文库时，一定要用大分子DNA？ 　　2. 如何检测和保证DNA的质量？ *