实验四 红细胞抗体吸收试验.pptVIP

实验八 红细胞抗体吸收试验 Erythrocyte antibody absorption test 一、检测原理 1.一定稀释度的抗体加入已知抗原的红细胞（检测抗体） 或被检红细胞加入已知效价的特异性抗血清（检测红细胞抗原） 2.溶液中的抗体就会结合到红细胞上，离心后将经过抗原吸收的血清和红细胞分开。 3.将吸收前、后的血清倍比稀释再与已知抗原的红细胞共同温育，检查血清和红细胞中抗体效价是否降低或消失。若明显降低或消失，证明抗体已被红细胞吸附，血清中含有与红细胞抗原相对应的抗体，或被检红细胞血型与加入的已知抗原的红细胞相同。 二、仪器和试剂 【器材】尖滴管、刻度吸管、小试管、离心机。 【标本】静脉血。 【试剂】 1．标准抗A、抗B血清。 2．2% A型及B型红细胞生理盐水悬液。 3．生理盐水。 三、实验步骤 采集静脉血2～3ml 分离血标本: 分离出血清和红细胞，分别作好标记 . 制备压积红细胞 将患者红细胞用生理盐水洗涤3次， 离心后弃去上层液。 标定抗血清 将标准抗A（抗B）血清倍比稀释，分别加入等量2% A型及B型红细胞生理盐水悬液，室温下反应15min后，1 000r/min离心 1min，观察凝集结果。选择出现（＋＋＋＋）凝集强度最高的1管稀释度作为抗A（抗B）吸收用作标定血清（一般应稀释到1∶32）。 三、实验步骤 抗体吸收： 取2支小试管，分别标记抗A、抗B。 按标记分别加入抗A、抗B标定血清0.5ml。 分别加入被检者压积红细胞0.5ml。 混匀，4℃放置1h，每10min摇动1次，使其充分接触 1 000r/min离心3min后，将上清液分别移入另2支试管，并标记抗A吸收液和抗B吸收液。 三、实验步骤 抗体鉴定：20支小试管 四、结果判断：吸收后抗体效价较吸收前降低2个滴度以上（Am亚型除外）者为阳性 吸收后抗A效价较未吸收抗A效价显著降低或消失为A型 吸收后抗B效价较未吸收抗B效价显著降低或消失者为B型 吸收后抗A及抗B效价都较未吸收抗A及抗B效价显著降低者为AB型 吸收后抗A及抗B效价较未吸收抗A及抗B效价无明显差异者为O型。 如试验的目的是鉴定A亚型，则按被检红细胞的吸收强度A1＞A2＞A3＞AX＞Am规律来判定 五、报告方式 本人血型为： 六、注意事项 抗A、抗B血清应标定，其效价不宜过高，应先将抗血清的效价稀释到1∶32为宜。因为抗血清抗体效价太高，抗血清中的抗体被亚型红细胞吸收后，效价下降不明显，难以判断结果 洗涤红细胞时生理盐水应尽量除尽，以免抗血清被稀释。 根据抗原、抗体反应的最适温度来决定吸收试验的温度。ABO系统以4℃为宜，Rh系统以37℃为宜 * * 姓名 血浆 姓名 血球 压积 RBC 抗A 标定 抗A 标定 已准备好 2%A RBC 2%B RBC 抗A 标定 抗B 标定 0.5ml 0.5ml 0.5ml压积RBC 0.5ml压积RBC 4℃放置1h 1 000r/min 离心3min 抗B 吸 收 液 抗A 吸 收 液 1 2 3 4 0.2mln.s 0.2mln.s 0.2mln.s 0.2mln.s 0.2mln.s 抗B吸收液0.2ml 抗A吸收液0.2ml 未吸收抗A 标定液0.2ml 未吸收抗B 标定液0.2ml 0.2 ml 2 : 4 : 8 : 16 : 32 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 0.2ml 2% A型 RBC 0.2ml 2% B型 RBC 混匀，1000r/min，1min，观察