第四部分单克隆抗体与基因工程抗体的制备资料讲解.pptVIP

第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备; 第一节 杂交瘤技术的基本原理 一、杂交瘤技术 二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存;第三节 基因工程抗体制备 一、人源化抗体　 二、小分子抗体 三、抗体融合蛋白 四、双特异性抗体 五、噬菌体抗体库技术; 第一节 杂交瘤技术的基本原理;B淋巴细胞:寿命短,分泌特异系性抗体 骨髓瘤细胞：寿命长 杂交瘤细胞：寿命长，单克隆抗体 ;流 程;不产生Ig的重链和轻链 HGPRT-;TK- 与提供淋巴细胞的动物品系相同; 动 物： BALB/c小鼠 7～12周龄 20g～25g体重 ;细胞性抗原： （1~2）×107/只，不加佐剂，2~3周重复一次 可溶性抗原： 首次，完全福氏佐剂+100微克抗原，3~6周100~200微克抗原，融合前3天，加强免疫;。;。;。;。;培养液： RPM1640培养液 DMEM培养液;细胞融合剂： PEG:分子量4000 的PEG是最常用的细胞融合剂 作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合 作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、分子量的PEG，其纯度与毒性有所不同;培养骨髓瘤细胞： 选择对数生长期的细胞进行传代培养 细胞形态：浑圆、透亮、均一、排列整齐 避免细胞返祖：定期用8-AG处理细胞 注意事项：切忌过多传代培养，可将细胞分装冻存于-80℃或液氮及干冰中;