茶尺蠖类免疫球蛋白基因EoHML的克隆和表达分析_余玉庚.pdfVIP

茶叶科学 2015 ，35 （4 ）：307~315 Journal of Tea Science 投稿平台： 茶尺蠖类免疫球蛋白基因EoHML 的克隆和表达分析 1,2 1 1 1,2 * 余玉庚 ，袁志军 ，殷坤山 ，付建玉 ，肖强 1. 中国农业科学院茶叶研究所，浙江 杭州 310008 ； 2. 中国农业科学院研究生院，北京 100081 摘要：类免疫球蛋白（Hemolin ）是一种鳞翅目昆虫特有的免疫相关蛋白，也是唯一的无脊椎动物免疫球蛋白 家族成员。本实验应用RACE 技术获得了茶尺蠖 （Ectropis obliqua Prout ）类免疫球蛋白基因的全长 cDNA 序 列，命名为EoHML （GenBank 登录号：KM885983 ），并分析了相关生物信息学特性，检测了病毒感染后基因 的表达水平。结果表明，EoHML 基因序列全长 1 772 bp ，包含 1 239 bp 的开放阅读框，编码412 个氨基酸， 预测蛋白分子量大小为45.8 kD ，等电点 （pI ）为8.297 ，属于典型的分泌型蛋白，且具有昆虫Hemolin 基因保 守的4 个 Ig 功能区和2 个N-glycosylation 位点。系统进化分析表明，该蛋白与目前已知的类免疫球蛋白氨基 酸序列的亲缘关系都较远，与烟草天蛾（Manduca sexta ）类免疫球蛋白氨基酸序列相似度最高，为 53% 。荧 光定量检测结果表明，茶尺蠖核型多角体病毒 （EoNPV ）感染茶尺蠖幼虫后该基因表达量显著升高，最高表 达量是正常对照的 36.5 倍，表明茶尺蠖EoHML 基因可能参与了茶尺蠖对EoNPV 的免疫代谢反应。 关键词：茶尺蠖；类免疫球蛋白；基因克隆；表达分析 中图分类号：S571.1 ；S435.711 文献标识码：A 文章编号：1000-369X （2015 ）04-307-09 DOI:10.13305/ki.jts.2015.04.001 Molecular Cloning and Expression Analysis of Hemolin Gene in Tea Geometrid (Ectropis obliqua) 1,2 1 1 1,2 1* YU Yugeng , YUAN Zhijun , YIN Kunshan , FU Jianyu , XIAO Qiang 1. Tea Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences , Hangzhou 310008, China; 2. Graduate School of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China Abstract : Hemolin, a unique immune protein, belongs to the immunoglobulin superfamily of Lepidoptera insects. A full length cDNA sequence of hemolin gene was cloned by RACE-PCR from tea geometrid (Ectropis obliqua Prout), which was named as EoHML (GenBank Accession No. KM885983). The results of bioinformatics characterization showed that