人类基因组的染色体作图.docVIP

第八节 人类基因组的染色体作图 　　一、人类基因定位方法 　　人体基因组由22条常染色体、一条X染色体和一条Y染色体组成。有30亿(3×109)个核苷酸对，其中70％(约2×109)核苷酸对是单拷贝的DNA，包括编码蛋白质的结构基因，和一大批功能目前不明的DNA序列。此外是一些长度不等，拷贝数不同的重复序列，约占人类基因组30％。 　　20世纪90年代，遗传学进入了揭示人类自身的遗传本质的伟大时代。这个时代的标志是自1991年始的为期15年、投资30亿美元的全球性的跨世纪的规模宏大的“人类基因组计划”(human genome project,HGP)。这项巨大的研究计划的主要内容是测定和分析人类基因组DNA的全部核苷酸对的排列顺序，认读全部遗传信息。这项研究在短短的几年时间里取得了惊人的进展。至 1990年时，人体基因组中已经确定了在染色体上位置的基因座位共6552个，已经测定了核苷酸序列的基因 772个；发现了 2275个基因座有多态性。制备了各条染色体的探针共11852个，完成了500万个核苷酸对的序列测定，约占人类基因组全序列的2／1000。 　　1992年绘制了除Y染色体以外的23条染色体的遗传连锁图，美、法科学家绘制出了人的Y染色体长臂和第21染色体长臂的图谱。这两项成果无疑为按期完成人类基因组计划展示了美好前景。 1993年的资料报道，已定位4183个基因。到1994年上半年为止，已定位了人的3300个遗传标记，已完成基因组作图第一期工程目标的60％。 　　将人体的基因(或遗传标记，marker)定位在特定染色体上，有下列方法： 　　(一)家系分析法通过分析、统计家系中有关性状的连锁情况和重组率而进行基因定位的方法。其中连锁分析法是最常用的家系分析法(pedigree method)。早在20世纪30年代，通过家系分析法已将人类的绿色盲、G6PD、红色盲、血友病A的基因定位在X染色体上。 　　1．如果某性状只出现在男性，则可将决定这个性状的基因定位在Y染色体上。 　　2．X连锁基因的定位根据伴性遗传原理，男性的X染色体总是来自他的母亲，而这条X染色体又总是传给他的女儿，所以在正常情况下在X染色体上的基因不会出现直接从男性到男性的传递方式，而是隔代交叉遗传，亦即外祖父出现的某种性状在母亲身上不出现(当外祖母为纯合正常时)，往往出现在其外孙身上。如果两个性状都表现为隔代交叉遗传，则可以判定这两个性状的基因都在X染色体上，或可以说这两个基因是性连锁的。但这种方法不能确定其排列顺序和连锁强度。 　　3．外祖父法在确定X染色体的连锁关系后，进一步确定其相对距离，但这一步必须测定重组率才可完成。根据双亲的基因型来判断子代中哪些是重组体，哪些是亲本型才可计算重组率。对于X染色体上的基因来说，只需要知道母亲的基因型是否为双重杂合体(即两对基因都处于杂合状态)。根据双重杂合体的母亲所生儿子中有关性状的重组情况，就可以估计重组率，而母亲X染色体上的基因组成，可以由外祖父的表型得知，因此，这种基因定位的方法称为外祖父法(grandfather method)。就 Aa、Bb两对连锁基因而言，母亲为双重杂合体时，可能有两种连锁相：互引相AB／ab(或称顺式相——cis phase)和互斥相Ab／aB(或称反式相——trans phase)。 　　现以人类X连锁的色盲基因(a)和蚕豆病基因(G6PD-)(g)为例说明外祖父法： 　　(1)若X染色体没有重组交换，则不论母亲是顺式还是反式杂合体，其儿子中的X染色体只有两种类型2)若母亲的X染色体的两个基因间发生了交换 　　根据外祖父的表型确定作为母亲的双重杂合体的连锁相(反式或顺式)，然后判断其儿子中的各种表型中哪种属于重组型，统计其重组体所占的比例，就可计算两个基因间的重组率，继而确定连锁基因间的相对距离。根据这种外祖父法测得色盲基因与G6PD基因间的相对距离约为5cM(平均每20个儿子中有一个重组体)。 　　家系分析法在原则上也可用于常染色体上的基因定位。当已知某染色体上的某种标记与某基因间的连锁关系后，就可以用家系分析法将该基因定位在这条染色体上。如决定Duffy血型的基因就是这样定位在人的1号染色体上的，这也是第一个用这种方法定位在常染色体上的基因。 　　(二)体细胞杂交定位法运用体细胞遗传学原理和体细胞杂交的新技术可以在离体条件下，应用细胞培养方法，研究体细胞融合、突变、分离以及连锁和交换等进行人类基因定位，绘制细胞学图，(其基本原理和主要方法将在第十二章作详细论述)。 　　1．克隆分布板法为了将某一个基因定位在某一条染色体上，必须建立包括人体24条染色体在内的一整套杂种细胞。其中每个杂种细胞都包括有一组人体染色体。这样的一套杂种细胞称为克隆分布板(clone panel)。利用这