油菜籽中硫代葡萄糖苷检测技术.docxVIP

作物生产技术专业/教学资源库 油菜籽中硫代葡萄糖苷检测技术 硫代葡萄糖苷（简称硫甙或硫苷）是存在于十字花科植物中的一类含硫次生代谢产物，本身无毒，但在与其伴生存在的芥子酶的作用下，降解成有毒的异硫氰酸酯、硫氰酸盐、腈类化合物等，引起动物甲状腺肿大等，饼粕难于饲用或降低其饲用价值。因此，硫苷是油菜品质检测的重要指标。 硫苷的测定方法有多种，根据被分析的对象，硫苷分析方法可分为两类：第一类是测定硫苷降解产物，间接计算硫苷的含量；第二类是直接测定完整硫苷或其衍生物；根据分析目的不同，硫苷的分析方法又可分为总量法和分量法：总量法是测定样品中所有硫苷总含量，而不考虑其侧链（R-）的差异；分量法是测定样品中硫苷的每一种硫苷组份的含量，以研究样品中硫苷组成类型的差异及不同硫苷组份的生物效应。按化学方法分类则有重量法、银盐滴定法、碘量法、比色法、色谱法和近红外光谱法。高效液相色谱法、专用速测仪法（分光光度法）和近红外光谱法是目前国内外油菜籽中硫苷含量测定最常用的方法，下面对这三种方法作重点介绍。 一、高效液相色谱法 1.方法原理 用70%甲醇水溶液提取硫苷，在阴离子交换树脂上纯化并酶解脱去硫酸根，反相C18柱分离，紫外检测器检测硫代葡萄糖苷。 2.仪器设备 （1）分析天平 （2）研钵或粉碎机 （3）漩涡混合器 （4）水浴锅 （5）离心机 （6）高效液相色谱仪 3.结果表示 检测结果显示为色谱峰，根据标准样品对检测结果进行定性和定量换算。硫苷测定结果表示方法有三种，一是干基饼粕中硫苷含量；二是含8.5%水杂饼粕中硫苷含量；三是含8.5%水杂油菜籽中硫苷含量。 该方法的优点是测定准确、可测定硫苷分量和总量，适于国家及部级质检中心用于出据第三方公正数据的检测及品种审定和区域试验材料硫苷含量的精确测定。缺点是仪器设备昂贵、测试费用高、条件严格，硫酸酯酶等大部分试剂及消耗品均需进口，且分离测定时间长，不适用于菜籽收购过程中的现场快速测定。 二、专用速测仪法（分光光度法） 1.方法原理 油菜籽中硫苷与特异性酶和专用显色剂反应生成有特征吸收峰的有色产物，采用分光光度法测定硫苷含量。 2.仪器设备 （1）微型粉碎机 （2）芥酸硫苷速测仪 3.结果表示 测定结果直接显示为每克饼粕或每克油菜籽中所含硫苷总量的微摩尔数（μmol/g），结果直接读数，不需要换算。 三、近红外光谱法 1.方法原理 根据光谱与硫苷含量之间的数学模型预测硫苷含量。 2.仪器设备 （1）近红外仪 3.结果表示 近红外预测结果表示与建模用油菜籽样品标准化学值表示一致。 该方法是80年代后期迅速崛起的一种物理测试技术，具有分析速度快、对材料无损伤、无化学试剂污染等特点，但受测定原理的影响，适用于高含量成分的检测，在双低优质油菜中硫苷含量的检测应用受到限制。