第十单元 第37讲基因工程.pptx

第37讲 基因工程;;;1.基因工程的概念 (1)供体：提供_________。 (2)操作环境：_____。 (3)操作水平：_____水平。 (4)原理：_________。 (5)受体：表达目的基因。 (6)本质：性状在_____体内的表达。 (7)优点：克服_______________的障碍，定向改造生物的_________。;2.DNA重组技术的基本工具 (1)限制性核酸内切酶(简称：_______) ①来源：主要是从__________中分离纯化出来的。 ②作用：识别特定的____________并切开特定部位的两个核苷酸之间的___________。 ③结果：产生_________或平末端。 (2)DNA连接酶 ①种类：按来源可分为E?coli DNA连接酶和______________。 ②作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的____________。;③DNA连接酶和限制酶的关系;能自我复制 有一个至多个＿＿＿＿＿＿＿＿ 有特殊的＿＿＿＿＿;1.判断下列说法的正误 (1)限制酶只能用于切割目的基因(　　) (2)DNA连接酶能将两碱基间通过形成的氢键连接起来(　　) (3)E?coli DNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端(　　) (4)质粒是小型环状DNA分子，是基因工程常用的载体(　　) (5)载体的作用是携带目的基因导入受体细胞中，使之稳定存在并表达(　　);2.下图中的图1和图2分别表示的是EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶的作用示意图。请据图回答： (1)请说出EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶识别的碱基序列及切割的位点。 (2)以上实例说明限制酶有何特性？;题组一　限制性核酸内切酶、DNA连接酶等酶的作用 1.如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示 限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是(　　) 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 A.①②③④ 　 B.①②④③　　 C.①④②③ D.①④③②;2.若要利用某目的基因(见图甲)和P1噬菌体载体(见图乙)构建重组DNA(见图丙)，限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ(A↓GATCT)、EcoRⅠ(G↓AATTC)和Sau3AⅠ(↓GATC)。下列分析合理的是(　　) A.用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 B.用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 C.用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 D.用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌???载体;3.下列关于载体的叙述中，错误的是(　　) A.载体与目的基因结合后，实质上就是一个重组DNA分子 B.对某种限制酶而言，载体最好只有一个切点，但还要有其他多种酶的切点 C.目前常用的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒 D.载体具有某些标记基因，便于对其进行切割;4.如图是表达新基因用的质粒的示意图，若要将目的基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的是(　　) A.HindⅢ 　　B.EcoRⅠ　　　C.EcoB 　D.PstⅠ;1.确定限制酶的种类 (1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 ①应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择PstⅠ。 ②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择SmaⅠ。 ③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。;(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类 ①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。 ②质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因；如果所选酶的切点不止一个，则切割重组后可能会丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。;2.载体上标记基因的标记原理 载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵抗相应抗生素，所以在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受体细胞，原理如下图所示：;;a.目的基因 b. _______ c.终止子 d._________;(2)基因工程的应用：培育转基因植物和___________，生产基因工程药物，进行_____治疗。;生物种类;?;2.蛋白质工程 (1)流程图 写出流程图中字母代表的含义： A._____，B.______，C.______