第15章_核酸的研究方法.pptVIP

一、核酸的分离、提纯和定量测定 2、RNA的分离纯化 二、核酸的超速离心 四、核酸的核苷酸序列测定 （一）DNA酶法测序 1 、加减法 Sanger于1975年设计的DNA快速测序法称为“加减法”，其原理为： 1）以DNA单链为模板，4种脱氧核苷三磷酸（dNTP）和DNA聚合酶，使合成反应尽可能是随机的，合成产物中各种长度的片段都存在。 2）从反应体系中除去 4 种dNTP,并将反应物分成 8 组，4 组用于加法系统，4组用于减法系统，其中： ① 加法系统每组分别只加A、G、C、T一种dNTP，DNA聚合酶的3 ’－5’外切酶活性将除该核苷酸外所有3’末端核苷酸都水解掉，于是3’末端都变成了该核苷酸。 ② 减法系统中，每组加3种dNTP（分别减去A、G、C、T一种dNTP）， DNA聚合酶能够把片度继续合成下去，直到遇上所缺的核苷酸才停止。这就得到了都在所缺核苷酸前一个核苷酸结尾的片段。 3）然后将各组样品进行含变性剂（8mol尿素）的聚丙烯酰胺凝胶电泳，从放射自显影的图谱上可以推测出DNA的核苷酸序列。 三） DNA最新测序技术 1、质谱法(mass spectrometry) 新型的电离技术如电喷雾离子化和基质辅助激光吸收技术使利用质谱法分析大片段DNA 成为可能。 ◆美日瑞三国科学家分享2002年诺贝尔化学奖 瑞典皇家科学院把２００２年诺贝