蛋白质组学实验教材课程.pptVIP

蛋白质组学实验;考 试 安 排;科 学 素 质;实 验 操 作;实验原理测验;实 验 一;实验目的;目的蛋白质的诱导表达 目的蛋白质的纯化 目的蛋白质的检测 ; 转化表达宿主菌 诱导优化表达目的蛋白 纯化目的蛋白 ;（一）;实 验 目 的;背景理论知识;蛋白质的表达是指为获取大量的目标蛋白而进行的有目的性的蛋白质合成。 需将编码所需蛋白的基因插入质粒或其他载体，然后导入活细胞，外源基因可在宿主细胞高效表达，从而获得有重要价值的蛋白质产品。 包括外源基因的克隆、转录、翻译、加工、分离纯化。 进行大量表达和纯化是为了在体外进行功能分析。;外源基因的高效表达,获得有重要价值的蛋白质产品;酵母表达系统 昆虫表达系统 哺乳动物细胞表达系统 表达的蛋白具有正常的活性、构象 技术难度较大、耗时、耗资;大肠杆菌系统由于遗传学、生物化学、分子生物学方面已被充分了解而成为表达异源蛋白质的首选表达系统。其遗传图谱明确，容易培养且费用低，生产成本低廉。 ;在E.Coli中表达重组蛋白： 目的基因受噬菌体T7强转录及翻译信号控制 表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导 充分诱导: 几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白, 数小时后达细胞总蛋白的50%以上 非诱导条件下: 可使目的基因完全处于沉默状态而不转录;实验原理;实验原理;原核表达系统菌株 菌株