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参考
红细胞计数
一、实验目的:
学习、掌握应用稀释法计数红细胞的方法
二、实验原理:
1.血液中血细胞数很多,直接计数有一定难度,需要将血液稀释到一定倍数,然后用血细胞计数板计数。
2.在显微镜下计数一定容积的稀释血液中的红细胞,之后需要将其换算成每升血液中所含的红细胞数。
三、实验用品:
器具:显微镜、血细胞计数板、小试管、采血管、1mL和5mL移液管、玻璃棒、刺血针、干棉球
试剂:哺乳动物红细胞稀释液、蒸馏水、75%酒精
四、实验方法与步骤:
1.采血
2.稀释:用移液管取10微升血液,加至2mL红细胞稀释液中
3.充池:将盖玻片的一边与计数池的纵线末端接触,然后缓慢放下,使盖玻片平放在计数室两侧的隆起上,醮少许红细胞稀释液靠近盖玻片乾元,靠毛细管作用将稀释液冲入计数池,于高倍镜下观察红细胞分布情况
4.静置计数板 2~3min 待经红细胞下沉后,大方格四角以及中央取5个4×4中方格红细胞数,用高倍镜或低倍镜计数
5.计数,计算
注意事项:
1.保证计数板和盖玻片清洁;以防影响计数结果的准确性 。
2.一次完成充池,如充池过少、过多、有气泡或出现任何碎片,应拭净计数板及盖玻片后重新操作。
3.充池后平放计数板,不能移动盖玻片。
4.计数板中细胞如果严重分布不均,应重新充池计数。
5.凡压线的细胞应按照数上不数下、数左不数右的原则,避免漏数或重复计数。
五、实验结果观察与记录以及分析:
1.结果计算:(53+113+76+60+64)/5=73.2
每16格平均73.2个红细胞,红细胞数:
73.2×25×200×10×1000000=3.66×10的12次方个/升
2.显微镜下图片
= 1 \* GB3 ①空白计数板:
低倍镜:
高倍镜:
= 2 \* GB3 ②400格:
= 3 \* GB3 ③16格(5个):
16格计数图片:
六、思考题:
1.稀释液装入计数板后,为什么静置一段时间才开始计数?
为使红细胞沉降完全
2.显微镜载物台为什么应置于水平位,而不能倾斜?
计数时是取某一视野内的细胞数来估算整体数的,如果倾斜了,会使一边多一边少,如果取了多的那边数个数,整体的就比实际值多了,取少的那边计算,整体就比实际值少了,误差太大。
3.分析影响计数准确性的可能因素。
采集的红细胞在实验过程中,因外界原因破裂;红细胞计数误差;红细胞在计数板上分布不均
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