第二章海洋动物细胞培养相关术语.ppt

生物技术上：生产各种生技术产品如：狂犬病、小儿麻痹 症等病毒疫苗，表皮生长因子及干扰素、白 细胞介素等生长因子及单克隆抗体等。 科学研究上：在病毒学、免疫学、遗传学、肿瘤学等方面。 临床医学上：胎儿的遗传性疾病分析，药物筛选及某些疾 病的治疗等 动物细胞与组织培养（cell and tissue culture）是动物细胞工程的重要技术基础。 动物的细胞与组织培养是指从活的机体中取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、适温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术。 组织培养的概念 组织培养这一名词实际上是一个通用名词，习惯上泛指所有的体外培养。根据培养物的不同可概括为三个不同概念：细胞培养、组织培养和器官培养。 组织培养：将活体的一小片组织放在盛有培养液的玻璃或塑料培养器皿中，待组织块粘着后，沿底面平面移动生长的过程称为组织培养。 从组织块中生长出来的仍然是细胞，细胞在生长的同时也发生移动，至使组织培养难以长时间维持其原有结构，结果也就成了细胞培养。 器官培养：是指采取某些措施使器官的原基、器官的一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的培养技术。 细胞培养：是指用机械或化学的方法将组织分散成单个细胞后，选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。 培养方式 群体培养：将大量细胞置与培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单细胞层获单细胞悬液。 克隆培养：将少数的细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，成为克隆。 体外培养细胞的分型 粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。 贴附(粘附)型细胞 粘附:是大多数有机体细胞在体内 生存和生长发育的基本存在方式 结果 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须粘附于一固相表面才能生存和生长。 悬浮生长型 概念 培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来源 自血，脾或骨髓， 尤以血中白细胞 癌肿细胞也可能 特点 在悬浮中生长良好 细胞圆形，单个或小细胞团 2．1 贴附 贴附并伸展，是多数体外培养细胞的基本生长特点。虽然血细胞如淋巴细胞在活体体内并无聚集的倾向并在体外可于悬浮状态中生长，但是大多数的哺乳动物细胞在体内和体外均附着于一定的底物而生长，在体外时这些底物可以是其他细胞、胶原、玻璃或塑料等。培养细胞在未贴附于底物之前一般均似球体样；当与底物贴附后，细胞将逐渐伸展而形成一定的形态，呈成纤维细胞样或上皮细胞样等。一些特殊的促细胞附着的物质(如基膜素、纤维连接素、E型胶原、血清扩展因子等)可能参加细胞的贴附过程。这些促细胞附着因子均为蛋白质，存在于细胞膜表面或培养液尤以血清之中。在培养过程中，这些带阳电荷的促贴附因子先吸附于底物上，悬浮的圆形细胞再与已吸附有促贴附物质的底物附着，以后细胞将伸展成其原来的形态。一般来说，从底物脱离下来的贴附生长型细胞，不能长时期在悬浮中生长而将逐渐退变，除非这是一些转化了的细胞或恶性肿瘤细胞。 细胞的贴附和伸展可以分为几个阶段。以成纤维细胞为例。一般在细胞接种后，很快(约5~10min)便可见细胞形成伪足，与底物形成一些接触点；随后细胞逐渐呈放射状地伸展开，细胞体的中心部分亦随之变为扁平；最后，细胞成为成纤维细胞的形态。 细胞的贴附和伸展受许多因素的影响。例如：离子的作用。如细胞的伸展需要有钙离子的存在，而含低浓度钙的培养液不利于细胞的伸展；机械、物理因素也可影响细胞的附着。如低温或培养液的流动过快均可妨碍细胞的附着。有些生物因素对细胞的伸展可能有影响。如表皮生长因子可刺激神经胶质细胞的皱褶活动，成纤维细胞生长因子能减少3T3细胞在底物上的扁平程度。 接触抑制 接触抑制是体外培养中某些贴附型细胞生长特性之一。一般情况下，正常的细胞不停顿的活动或移动，其外周的细胞膜呈现一些特征性皱褶样活动。但是，当两个细胞由于移动而互相靠近发生接触时，细胞不再移动，在接触区域的细胞膜皱褶样活动将停止，从而使细胞停止运动。这种由细胞接触而抑制细胞运动的现象称为接触抑制(Contact Inhibition)。由于细胞之间有接触抑制特性，因此，一般的正常细胞并不互相重叠于其上面而生长，但是肿瘤细胞由于无接触抑制能够继续移动和增殖，导致细胞向三维空间扩展，使细胞发生堆积（Pile