基因工程原理-第5章重组基因导入受体细胞.pptVIP

基因工程原理 Principle of Gene Engineering 第五章 重组基因导入受体细胞 1.原核受体细胞 较为理想的受体细胞： 大部分没有细胞壁，便于外源DNA进入 没有核膜，染色体DNA没有固定结合的蛋白质 基因组简单，不含线粒体、质体 多为单细胞，容易获得一致性材料，易于扩大培养或发酵生长 常用细菌：大肠杆菌。 大肠杆菌。 酵母菌表达系统的优势： 结构最为简单的真核生物之一，基因表达调控机理比较清楚，遗传操作简单 培养简单 遗传稳定性高，易于扩大培养或发酵生长 安全性高，无致病性，不会对外界环境造成污染 具有较好的转译后加工机制，便于真核生物表达 3. 植物受体细胞 优点：真核细胞、细胞的全能性。 4. 动物细胞 受体细胞包括：小鼠BHK细胞、中国仓鼠卵巢细胞CHO，猴肾细胞等 受体动物：鼠、牛、羊、鱼等 第二节 重组基因导入受体细胞 转化（transformation）——重组质粒DNA分子进入受体细胞，并在受体细胞稳定维持和表达的过程，转化后的受体菌，称转化子。 第三节 重组子筛选 无细胞翻译系统的作用： 杂交选择转译检测法 （3） 荧光素标记探针：用荧光素标记核酸、抗生物素蛋白或抗地高辛抗体。 荧光物质异硫氰酸荧光素（黄绿色） 罗丹明（红色） 羟基香豆素（兰色） 3. 标记探针的方法 （1） 切口平移标记法 （2） 随机引物标