培养细胞换液、传代和MTT比色法测定细胞活力.pptVIP

实验二 培养细胞换液、传代和  MTT比色法测定细胞活力 中国医科大学基础医学院 组织工程学教研室 范 军 实验目的 了解细胞换液和传代的原理。 熟悉细胞传代的常规步骤。 学习测定细胞活力的MTT比色法。 实验要求 掌握培养细胞的换液、传代的实验方法。 掌握培养细胞活力测定的MTT比色法。 实验器材及试剂 实验器材：超净台、培养箱、倒置显微镜、低温离心机、酶标仪、打印机、酒精灯、培养瓶、96孔培养板、吸管、离心管、注射器等。 试剂：原代培养的细胞、培养基、PBS、0.25%胰酶、MTT、DMSO等。 实验原理 分裂增殖和生长发育是体外培养细胞的两大生命特征。大多数类型的有机体细胞在培养过程中能始终保持有丝分裂的能力。培养中的细胞只要生长空间许可，就会发生分裂增殖。只有当增殖生长至互相紧密接触成片时，便发生所谓的“接触抑制”现象而停止增殖。无论是贴壁生长的细胞和悬浮生长的细胞，随着培养时间的延长，细胞分裂繁殖，细胞密度增加会达到饱和，一方面可能长满培养空间，另一方面细胞之间互相接触而发生接触性抑制，生长速度逐渐减慢甚至停止。 实验原理 例如贴壁细胞的相互汇合，使整个瓶底逐渐被细胞覆盖，细胞难以继续生长繁殖，需要进行分瓶培养，这种使原代细胞经分散接种的过程称之为传代。传代培养的实质就是分割后再一次培养。 实验原理 MTT比色法的原理是活细胞的线粒体脱氢酶能将