毕业设计（论文）《农杆菌介导GmftsH基因的烟草遗传转化》.docVIP

PAGE 本科生毕业论文（设计） 题 目: 农杆菌介导GmftsH基因的烟草遗传转化 姓 名: 学 院: 农学院 专 业: 农学 班 级: 学 号: 指导教师: 职称: 2011 年 5 月 15 日 目 录 摘要 3 关键词 3 Abstract 3 Key Words 3 TOC \o 1-4 \h \z \u 1 材料与方法 4 1.1 材料 4 1.1.1 植物材料 4 1.1.2 菌株和载体 5 1.1.3 培养基 5 1.1.3.1 农杆菌培养基 5 1.1.3.2 烟草组织培养基 5 1.1.4 主要试剂 5 1.2 方法 5 1.2.1 农杆菌介导法转化烟草 5 1.2.1.1 受体材料准备 5 1.2.1.2 农杆菌的培养 6 1.2.1.3 农杆菌侵染外植体及培养 6 1.2.2 转基因烟草的分子鉴定 6 1.2.2.1 转基因烟草DNA的提取 6 1.2.2.2 PCR鉴定 7 1.2.2.3 转基因烟草RNA的提取 7 1.2.2.4 cDNA的合成 8 1.2.2.5 RT-PCR检测 8 2 结果与分析 9 2.1 影响根癌农杆菌转化烟草的因素 9 2.1.1 菌液浓度对转化效率的影响 9 2.1.2 侵染时间对转化率的影响 9 2.1.3 共培养时间对转化效率的影响 10 2.1.4 预培养时间对转化效率的影响 10 2.2 转基因植株的获得及分子检测（PCR、RT-PCR） 11 2.2.1 转基因植株的获得 11 2.2.2 转基因植株的分子检测 11 3 讨论 12 致谢 13 参考文献 13 农杆菌介导GmftsH基因的烟草遗传转化 摘要：利用农杆菌介导的方法将GmftsH基因转入三生烟烟草中，将0.5cm×0.5cm烟草外植体浸泡在培养好的农杆菌悬浮液中，震荡4～5分钟，然后置于MS1固体培养基上，在25℃的组织室内共培养2天，待再生幼苗根系发达后，将不定芽进行移栽从而获得了三生烟烟草转化植株。再经PCR检测，为阳性的植株均能扩增出与目的片断大小一致的特异性条带，初步表明GmftsH基因已经转到这些烟草基因组中。最后通过RT-PCR反应进行阳性转基因植株GmftsH基因在转录水平的检测，在转基因烟草中能够扩增出特异条带，而在野生型烟草对照中没有检测到特异条带，说明该基因在RNA水平上得到表达。 关键词：GmftsH基因；烟草；农杆菌；遗传转化；PCR鉴定 GmftsH agrobacterium-mediated genetic tobacco genetic transformation Abstract：In the way of agrobacterium-mediated,putting GmftsH gene into Sansheng tobacco, then we make 0.5 cm x 0.5 cm tobacco explant soaked in cultivating good agrobacterium suspension, Concussing 4 to 5 minutes, then placed on MS1 solid medium, and Altogether training for two days in 25 ℃ organization indoor.After regeneration seedling root developed enough，transplanting adventitious bud thereby obtaining Sansheng tobacco conversion plants.PCR assay is the common way to validate the transgenic Plant, specific corresponding f