原生质体的分离与融合(1).pptVIP

原生质体的分离与融合 什么是原生质体 原生质体，是指出去细胞壁的植物细胞的部分。 由Hanstein 1980年提出 在适当条件下，原生质体可以成功培养长出细胞壁，并通过细胞分裂。 原生质体不仅对细胞融合研究有价值，且能通过裸露的质膜获得外源DNA、细胞器、细菌和病毒颗粒等。 一、原生质体分离 原生质体分离的基本原则是 保证原生质体不受伤害并不损害其再生能力。 1. 机械法 只有储藏组织中较大的、高度液泡化的细胞才能用于分离原生质体，如洋葱球茎鳞片、萝卜根、甜菜根等； 缺点：产量低；方法枯燥无力；因破碎细胞释放物的存在，原生质体活力低。 2. 酶法 Cocking 在1960年证实了可用酶分离原生质体。Takabe等1968年首次用商业酶试剂分离原生质体，并在1971年获得再生植株。 缺点是：不纯酶制剂所含的杂质可能会对原生质体产生不同程度的毒害作用。 二、影响原生质体分离的因素 原生质体分离时主要考虑取材、酶的种类、纯度、酶液的渗透 压、酶解时间、温度等。 1 组织和细胞材料的生理状态 植物幼苗或新生枝的完全伸展叶片的叶肉组织是分离原生质体 的最方便、最合适的植物材料。叶肉细胞排列松散，酶试剂很 容易达到细胞壁。用于分离原生质体的愈伤组织或悬浮细胞应 当处于生长早期或指数生长期。 采用