pcr技术发展与展望课件.docVIP

PCR技术的发展及展望 摘要：PCR技术是遗传与分子生物学分析的根本性基石，近年来．基于常规 PCR技术 开发出了许多新的用途。综述了 PCR技术的主要扩展。 关键词 ：PCR技术 1971年Khorana等最早提出 PCR理论：“ DNA 变性解链后与相应引物杂交，用 DNA 聚合 酶延伸引物，重复该过程便可克隆 tRNA 基因”。因当时基因序列分析方法尚未成熟、热稳 定DNA 聚合酶还未发现及寡聚核苷酸引物合成仍处于手工和半自动阶段，核酸体外扩增设 想似乎不切实际， 且Smith等已发现了 DNA 限制性内切酶， 使体外克隆基因成为可能， Khorana 等的早期设想被忽视。 1985年Mullis 等用大肠杆菌 DNA 聚合酶工 Klenow 片段体外扩增哺乳动 物单拷贝基因成功以及 1988年Saiki等将耐热 DNA 聚合酶 (Taq酶)引入PCR，使扩增反应的特 异性和效率大大提高， 并简化了操作程序， 最终实现了 DNA扩增的自动化， 迅速推动了 PCR 的应用和普及。 PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应，是指在 DNA 聚合酶催化下。以母 链DNA 为模板，以特定引物为延伸起点。通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母 链模板 DNA 互补的子链 DNA 的过程。现已被广泛应用于农学、植物病理学等领域的研究。 最初的 PC