实验四植物叶绿素的定量与分光光度计的使用.pptVIP

植物叶绿素的定量测定及吸收光谱 一、实验目的 学习基本的物质定量测定方法与分光光度计的使用。 学习测定叶绿素总量及吸收光谱的技术 二、实验原理 叶绿素的含量测定方法有多种，其中主要有： 1、原子吸收光谱法： 2、分光光度法： 叶绿素a 和叶绿素b 在649nm 和665nm 处有最大吸收，且两吸收曲线相交于652nm 处。因此测定提取液在649nm、665nm，并根据经验公式可分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。 三、仪器、原料和试剂 分光光度计、天平、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、新鲜的植物叶片、95％乙醇(或80％丙酮)、石英砂、碳酸钙粉 四、操作步骤 1.叶绿素滤液的提取制备： 2.比色与结果计算： 3.吸收光谱曲线测定与绘制 1.叶绿素滤液的提取制备： 叶片0.5g、石英砂和碳酸钙粉、3mL95％乙醇，研磨之糊状；再加乙醇10mL ，研磨至组织变白 。 静置3～5min 。 用滤纸过滤至棕色容量瓶中，少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次 。 定容至25mL。 2.比色与结果计算： 以95％乙醇为空白对照，在波长665nm、649nm 和652nm 下测定滤液的吸光度。 95 ％乙醇提取液中色素浓度计算公式（mg/L）： Ca=13.95A665-6.88A649　　 Cb=24.96A649-7.32A665