实时荧光定量PCR介绍.pptxVIP

March 2, 2012 ;主 要 内 容;Real Time PCR基础知识;Real Time PCR的用途;Real Time PCR的原理;Real Time PCR基础知识;;荧光染料嵌合法（SYBR Green I）;;;;;主 要 内 容;RT Primer的选择;;Real Time PCR引物设计;两条引物的Tm值尽量接近，应用专用软件计算Tm值;探针的Tm比引物高8-10℃;线性关系、扩增效率确认;主 要 内 容;标准曲线制作;标准品的种类;质粒标准品构建流程;体外转录RNA标准品构建流程;理想的标准品扩增曲线;理想的标准曲线;Real Time PCR解析方法;融解曲线分析;特异性产物;;绝对定量解析方法;绝对定量解析方法;相对定量解析方法;相对定量解析方法;主 要 内 容;绝对定量应用例 对SARS培养液中所含SARS病毒RNA进行定量;; 纯化的SARS Control RNA OD值测定结果 ;;探针的选择 ;;;相对定量应用例 分析小鼠不同组织中PAH基因表达量的变化情况; Total RNA提取 ;提取Total RNA后电泳照片;目的基因标准曲线制作结果;扩增曲线图; 通过双标准曲线方法计算得出，苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因在小 鼠肝脏中的表达量明显高于其在脑组织中的表达水平，二者的表达量比 例约为3757：1 。;Re