七章亲和层析知识课件.pptVIP

六、亲和层析柱的再生 当洗脱结束后，应连续用大量的洗脱液或高浓度的盐溶液彻底洗涤柱子，接着再用平衡缓冲液使层析柱重新平衡。 经过这样处理的柱子可再次上样，进行第二次亲和层析。 一般亲和层析柱都可以反复使用多次。 第三节 提高吸附剂的操作容量 亲和吸附剂的操作容量的影响因素： 配体性质 配体在吸附剂中的含量 配体与吸附物结合时的位阻效应大小、 基质的多孔性 操作条件 等因素 一、在配体和基质之间引入“手臂” 1．原理 在配体和基质之间，特别是在小分子的配体和基质之间，引入适当长度的“手臂”(arm)，使配体离开基质的骨架， 或许可以 减少基质的立体位阻效应， 增加配体的活动度,伸入溶液的深度, 从而提高吸附剂的操作容量。 例如, 用对氨基苯-?-D-硫代吡喃半乳糖苷作为配体纯化?-半乳糖苷酶时， 如果把配体直接连于Sepharose 4B上所产生的衍生物A，则不能吸附? -半乳糖苷酶。 当Sepharose上引入氨乙基乙酰胺或引入 3，3’- 二氨基二丙胺琥珀酰胺再接配体时，所产生的衍生物B和C(图7-8 B、C)都能吸附? -半乳糖苷酶。 从衍生物A、B、C来看，随着手臂的增长，吸附能力也增加了。 但是，并非越长越好，若过长，则有可能发生“手臂”折叠弯曲，从而导致吸附容量降低。 图