以DC为基础的肿瘤疫苗策略.ppt

以DC为基础的肿瘤疫苗策略 肿瘤细胞/肿瘤细胞提取物冲击DC 1 蛋白质冲击DC 2 肿瘤抗原肽冲击DC 3 肿瘤抗原DNA/RNA冲击DC 4 肿瘤抗原在体内冲击DC 5 1.肿瘤细胞/肿瘤细胞提取物冲击DC 1.肿瘤细胞/肿瘤细胞提取物冲击DC 1.肿瘤细胞/肿瘤细胞提取物冲击DC 1.肿瘤细胞/肿瘤细胞提取物冲击DC Yasuda 1.肿瘤细胞/肿瘤细胞提取物冲击DC 2.蛋白质冲击DC 对于抗原表位尚不了解的肿瘤，可以可溶性蛋白作为抗原装载DC 在肿瘤动物模型和肿瘤患者中，以肿瘤抗原蛋白转染的DC在体外和体内均可诱导出针对肿瘤的抗原特异性CTL反应 优点：可使那些因MHC限制而排除在肽疫苗治疗之外的患者受益。 3.肿瘤抗原肽冲击DC 以肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原肽装载DC的肿瘤疫苗 4.肿瘤抗原DNA/RNA冲击DC 载体 4.肿瘤抗原DNA/RNA冲击DC DNA/RNA疫苗可在体外合成而大量获得，并可包含多个抗原表位，还可经修饰使其功效加强。 RNA疫苗只在宿主细胞的胞质中表达，DNA疫苗需进入细胞核后转录——癌变的潜在危险 DNA疫苗稳定性好，功效长久 5. 肿瘤抗原在体内冲击DC 肿瘤抗原 GM-CSF, IL-4 脂质体 DC装载抗原策略 免疫佐剂的使用 DC的体外扩增 免疫途径 临床病人的选择 DC肿瘤疫苗的主要影响因素 DC的来源 DC的分离纯化 DC的培养基 DC培养使用的细胞因子 DC细胞的鉴定 DC的培养技术 DC的来源——骨髓 取材有限， HSC 含量极少,大约为1/ 105 单个核细胞。 BM 为侵入性操作,患者不容易接受。其增殖及多向分化能力随供者年龄增加 体质衰弱而减弱。 在体外培养过程中有自发分化和衰老的现象, 且BM 有病毒污染的可能 DC的来源——外周血 标本来源充足, 取材方便, 因子组合简单, 培养步骤简单、经济。 HSC 含量极少, 最终收获的DC 数量少, 活力和纯度均不高。 其端粒及端粒酶活性均长于和高于BM 及PB HSC/ HPC ,并且低表达或不表达细胞凋亡配基CD95/ Fas ,故体外生存期更长 DC的来源——脐带血 较丰富的原始且能重建长期造血的HSC/ HPC , 自我增殖及多向分化能力较强 对刺激因子的反应和增殖能力、体外集落形成能力、刺激后进入细胞周期的速度以及自泌生长因子能力均强于BM 及PB 的HSC/ HPC , 脐带血 优点 缺点 产量大、纯度高等 母婴无不良影响,不涉及社会、伦理及法律等方面的争论, 受胎盘屏障保护,被污染概率低 CB 量较少,通常只有50～150 ml ; CB HSC 对理化变化较敏感, 洗涤、分离或运用传统方法去除红细胞的方法均会导致HSC的严重丢失 分离纯化 操作简单, 细胞成分复杂,多次传代后不能纯化,增殖活力相对较低 连续 贴壁法 操作简单,成本低廉,纯化率较低 密度梯度离心法 细胞纯度高( ≥90 %) ,但操作复杂,价格昂贵,单克隆抗体选择不当,容易丢失目的细胞 免疫磁珠 分选法 联合 DC的培养基 10%胎牛血清——引起机体免疫反应 自体单核细胞条件培养基 细胞因子 维持DC 分化、发育、存活、功能的最基本的CK, 主要使HSC 向DC、单核及巨噬细胞分化,并以生成单核细胞为主 GM-CSF IL-4 IL-4 通过抑制单核细胞向巨噬细胞方向的分化而诱导其向DC 方向分化 IL-4 可以增加并稳固GM-CSF 诱导的CD1a 的表达 IL-4 与极低浓度GM-CSF 协同刺激iDC 后,促进DC 成熟,上调MHCⅡ和共刺激分子表达; IL-4 还能促进IL-12 分泌, TNF-α GM-CSF 体外诱导DC 的体系中是必需的,早期诱导细胞进入细胞周期,促进细胞增殖; 后期阻止细胞向粒系的分化,上调GM-CSF 受体表达,并促进DC 成熟 可抑制DC 发生自发性凋亡 DC的鉴定 形态学鉴定 表面特异性标记物的鉴定（CD1a、CD83） 功能学鉴定： 　混合淋巴细胞反应 促T 细胞增殖作用 　 DC 分泌IL-12 的检测 DC的鉴定 形态学鉴定 表面特异性标记物的鉴定（CD1a、CD83） 功能学鉴定： 　混合淋巴细胞反应 促T 细胞增殖作用 　 DC 分泌IL-12 的检测 DC体外培养技术 外周血提取DC 密度梯度离心法 GM-CSF、IL-4、TNF-α联合诱导培养 连续贴壁法 DC DC鉴定 DC装载抗原策略 免疫佐剂的使用 DC的体外扩增 免疫途径 临床病人的选择 DC肿瘤疫苗的影响因素 静脉、皮内、皮