《转基因耐盐甘蓝型油菜的研究》【毕业设计论文】.docVIP

南京晓庄学院2012届本科毕业论文 PAGE 10 PAGE 10 分 类 号： 学校代码： 11460 学 号：南京晓庄学院本科生毕业论文 根癌农杆菌介导转化AtNHX1基因甘蓝型油菜的研究 Research of AtNHX1 Gene transformation in Brassica napus by Agrobacterium tumefaciens 所在系（院）：生物化工与环境工程学院 学 生 姓 名： 指 导 教 师： 研究起止日期：二○一一年三月至二○一二年五月 二○一二年五月 根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化甘蓝型油菜的研究 学 生： 指导老师： 摘要：以甘蓝型油菜带柄子叶为转化受体，通过根癌农杆菌介导法，将Na+/H+逆向转运蛋白AtNHX1基因转入甘蓝型油菜中。结果表明，外植体经浓度OD600为0.4的菌液中侵染8-10min，卡那抗性绿苗率达3.75℅，经过对抗性植株的PCR检测证明外源基因已经整合到油菜基因组中，为提高甘蓝型油菜的耐盐能力提供了新的途径。 关键词：根癌农杆菌；带柄子叶；卡那霉素；转基因甘蓝型油菜； Research of AtNHX1 Gene transformation in Brassica napus by Agrobacterium tumefaciens Student: LiangYi Tutor: Cai Xiao-ning Abstract： Chosen cotyledon petiole as the recipient for transformation. AtNHX1 gene was transferred into Brassica napus by Agrobacterium tumefaciens transferring system. The results showed that the best physiological and transforming condition was in OD600 0.4 liquid bacterium for 8-10 min, 3.75℅ kan-resistant green seedings were obtained. It was proved that NHX gene was inserted into the genome of oilseed by the methods of PCR.It could provide a new way to improve the salt tolerance about Brassica napus. Keywords：Agrobacterium tumefaciens;Cotyledons with petiole; Kanamycn；Transgenic Brassica napus; TOC \o 1-3 \h \u 目录 13860 引 言 4 4474 1 实验材料 5 824 1.1 植物材料 5 31659 1.2 菌种及质粒 5 24191 1.3 抗生素 5 29163 1.4 培养基的种类 5 25248 1.4.1植物培养基 5 13191 1.4.2细菌培养基 5 11246 1.5 农杆菌菌液的制备 6 17627 2 实验方法 6 26975 2.1 无菌苗的培养 6 3298 2.2 油菜基因型的筛选 6 4699 2.1.2预培养 6 2134 2.1.3分化培养 6 20449 2.1.4继代培养 6 1730 2.1.5生根培养 6 23493 2.1.6再生苗的移出 6 18742 2.3 植物表达载体PX6- AtNHX1转化甘蓝型油菜 6 28454 2.3.1预培养 6 22392 2.3.2外植体的侵染 7 24907 2.3.3共培养 7 18411 2.3.4筛选培养 7 25206 2.3.5继代培养 7 22401 2.3.6抗性苗的获得 7 23174 2.3.7生根培养 7 23160 2.4 转基因植株的检测 7 29009 2.4.1甘蓝型油菜DNA的提取 7 5035 2.4.2PCR基因扩增 8 14108 2.4.3基因条带的检测 9 12222 3 实验结果 9 21926 3.1 不同基因型对甘蓝型油菜外植体分化率的影响 9 19064 3.2 芽苗的生根培养 10 13970 3.3 再生苗的移出 11 22525 3.4 植物表达载体PX6- AtNHX1转化得到的油