第3讲DNA的复制和修复.ppt

第三讲 DNA的复制与修复 第一节 DNA的复制 一、DNA的半保留复制 二、 边解链边复制 三、DNA半保留复制的不同类型 四、半不连续复制 五、DNA复制过程 ??? 根据反应阶段和所需的不同酶类，DNA的复制可被分为三个阶段，即复制起始、延伸和终止。每个DNA复制的独立单元被称为复制子（replicon），主要包括复制起始位点（Origine of replication）和终止位点（terminus）。原核生物的整个染色体上一般只有一个复制起始位点。 ??? 1、DNA replicase system Helicase，任何DNA在被复制前都必须解开双链，这个过程是由helicase来完成的，它可在ATP的作用下将DNA母链不断解开形成单链。Topoisomerase，主要功能是消除DNA解链过程中所产生的扭曲力。DNA结合蛋白，使新解链的DNA保持稳定结构。Primases，为DNA复制提供RNA引物。DNA polymerases，合成新生DNA链，切除RNA引物。DNA Ligases，使新生DNA链上的缺口（3-OH, 5-p）生成磷酸二酯键。 （1）DNA聚合酶 （2）引物酶及引发体 （3） DNA链解旋，解链的酶和蛋白 （4） 拓扑异构酶（topoisomerase) （5） 连接酶（ligase) 2、大肠杆菌DNA复制 复制起始的主要步骤 a. 大约20个左右的DnaA蛋白首先与OriC中的4个9碱基重复区相结合； b. 识别并使3个13碱基串联重复区DNA形成开环结构； c. DnaB蛋白在DnaC的帮助下与未解链序列结合。每六个DnaB蛋白形成一组并与一条DNA母链结合，可在不同方向同时起始DNA的复制。当细胞中存在足够的SSB和DNA gyrase时，DnaB的解链效率非常高。 （2）DNA子链的延伸 ??? 主要包括两个不同但相互有联系的事件，即前导链和滞后链的合成。由DNA helicase解开双螺旋，由拓朴异构酶消除DNA链上的扭曲力，SSB结合使DNA单链稳定。 ??? 前导链的合成：由DnaG（primase）在复制起始位点附近合成一个10-60 nt的RNA引物，然后由polII把dNTP加到该引物上。??? 滞后链的合成：产生Okazaki fragments，消除RNA引物并由DNA pol I补上这一小段DNA序列，由DNA Ligase把两个片段相连。 3. DNA链的终止 ??? 当子链延伸达到terminus region（ter，带有多个20bp序列）时，DNA复制就终止了。Ter有点像一个陷井（trap），使复制叉只能进入，不能出来。Ter的功能主要是由Ter-Tus复合物（ter utilization substance）来完成的。 4. 真核细胞DNA复制的特点 真核生物的origin of replication被称为ARS（autonomously replicating sequences）或者被称为replicators。Yeast replicators长约150bp，有多个保守重复区，共有约500个replicators分布于酵母的17条染色体中。 七、DNA复制的调控 1.ColE1质粒DNA的复制调控 2.真核细胞DNA的复制调控 第二节 DNA的损伤修复 1． 错配修复（mismatch Repair） ??? 错配修复对DNA复制忠实性的贡献力达102-103，DNA子链中的错配几乎完全都被修正，充分反映了母链的重要性。 2. 碱基切除修复（Base-Excision Repair） ??? DNA gylcosylases能特异性识别常见的DNA损伤（如胞嘧啶或腺嘌呤去氨酰化产物）并将受损害碱基切除。去掉碱基后的核苷酸被称为AP位点（apurinic or apyrimidinic）。细胞中最常见的Uracil Glycosylase就能特异性切除细胞中的去氨基胞嘧啶。 3. 核苷酸切除修复（nucleotide-excision repair） ??? 当DNA链上相应位置的核苷酸发生损伤，导致双链之间无法形成氢键，由核苷酸切除修复系统负责进行修复。 第三节 DNA的转座 DNA的转座，或称移位(transposition），是由可移位因子（transposable element）介导的遗传物质重排现象。已经发现转座这一命名并不十分准确，因为在转座过程中，可移位因子的一个拷贝常常留在原来位置上，在新位点上出现的仅仅是拷贝。因此，转座有别于同源重组，它依赖于DNA的复制。 1.转座子的分类和结构特征 b.复合式转座子（composite transp