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第六章 发酵工艺过程控制 发酵,原本是指在厌氧条件下葡萄糖通过酵解途径生成乳酸或乙醇等的分解代谢过程。 在广义的工艺上,则把发酵看做是微生物把一些原料养分在合适的条件下(通常是需氧)经特定的代谢转变成产物的过程。 发酵是一种很复杂的生化过程,发酵生产受许多因素的影响和工艺条件的制约。需要多年的经验才能掌握。 生产菌种的代谢规律和发酵调控的基本知识对稳定生产,提高产量意义重大。 第一节 发酵过程中的代谢变化与控制参数 微生物发酵的生产水平不仅取决于生产菌种本身的性能,而且要赋以合适的环境条件才能使它的生产能力充分表达出来; 必须了解有关生产菌种对环境条件的要求,如培养基、培养温度、pH、氧的需求等,并深入了解生产菌在合成产物过程中的代谢调控机制以及可能的代谢途径,为设计合理的生产工艺提供理论基础; 通过各种监测手段如取样测定随时间变化的菌体浓度,糖、氮消耗及产物,以及采用传感器测定发酵罐中的培养温度、pH、溶解氧等参数情况,并予以有效地控制,使生产菌种处于产物合成的优化环境中。 1、分批发酵 分批培养过程中随着培养基中的营养物质不断减少,微生物生长的环境条件也不断变化,因此,微生物分批培养是一种非稳态的培养方法。 2、微生物分批培养生长速度的动力学方程 1942年,Monod提出了在特定温度、pH值、营养物类型、营养物浓度条件下,微生物细胞的比生长速率与限制性营养物浓度之间存在如下关系: μ=μmaxS/(Ka+S) μmax——微生物的最大比生长速率 S——限制性营养基质的浓度 Ks——饱和常数 Monod方程的几点说明 a:分批培养过程的经验方程,在纯培养情况下,只有当微生物细胞生长受一种限制性营养物质制约时,与实验数据相一致。 b:K s反映了微生物对营养物质的吸收的亲和力的大小,数值越小,表明微生物对营养物质的亲和力大。反之则亲和力小。一般微生物的Ks值为0.1—120mg/L,是很小的。 c:μmax随微生物的种类和培养条件不同,一般来说细菌的μmax大于霉菌,就同种微生物来说,培养温度升高,μmax增大。 3、分批培养时微生物细胞的生长与产物形成的动力学 在发酵过程中,常用得率系数来描述微生物生长过程的特征,即生成的细胞或产物与消耗的营养物质之间的关系。 在实际中,最常用的是细胞得率系数 (Yx/s)和产物得率系数(Yp/s),分别定义为消耗1g营养物质生成的细胞的克数和生成产物的克数。 工业生产中可通过测定一定时间内细胞和产物的生成量及营养物质的消耗量来进行计算。 (1)有关分批发酵的几点讨论 生产的对象不同,掌握工艺的重点不同 产物为细胞本身——采用能支持最高生长量的培养条件 产物为初级代谢物——延长对数生长期 产物为次级代谢物——缩短对数生长期,延长稳定期 (2)分批发酵的优缺点 优点:操作简单,周期短,染菌的机会减少生产过程易于控制、产品质量易掌握。 x 缺点:分批发酵不适于测定过程动力学,存在基质的抑制问题,出现二次生长现象,对与一些对基质敏感的产物,由于养分易耗尽,产率较低。 在发酵工艺中,要想控制发酵,使其按人的意志转移,是很难办到的。因为影响发酵的因素太多,有些因素还是未知的,但了解发酵工艺条件对过程的影响和掌握反映菌的生理代谢和发酵过程变化的规律,可以帮助人们有效地控制微生物的生长和生产。 发酵工艺中几个最常用的控制点 温度控制 pH值控制 溶氧控制 二氧化碳控制 泡沫的控制 一、温度对发酵的影响 对细胞生长的影响:温度升高,从酶反应动力学来看,生长代谢加快,但由于酶很容易热失活,所以高温时菌体易于衰老; 对产物形成的影响:菌体生长速率、呼吸强度和代谢产物形成速率的最适温度往往是不同的;温度升高,一般产物生成提前; 对生物合成的方向的影响:反馈抑制随温度变化而改变; 对发酵液物理性质及溶解氧的影响:影响氧的溶解和传递,影响一些基质的分解,间接影响生物合成。 1、影响发酵温度的因素 发酵热的成分 生物热:微生物生长繁殖过程中的产热 搅拌热:机械搅拌造成的摩擦热 蒸发热:被通气和蒸发水分带走的热量 辐射热:发酵罐罐体向外辐射的热量 Q发酵= Q生物+ Q搅拌- Q蒸发-Q辐射 2、发酵热的测定 ①通过冷却水进出口温度和流量测定: Q发酵=G·cw·(t1-t2)/V G—冷却水流量; Cw—水的比热; V—发酵液体积。 ②通过发酵液温度随时间上升的速率测定: Q发酵=(M1c1+ M2c2)·S M1、c1 —发酵液质量、比热; M2、c2 —发酵罐质量、比热; S—温度上升速率。 3、最适温度选择与发酵温度控制 温度变化的一般规律与控制的一般原则 接种后发酵温度有下降趋势,此时可适当升高温度,以利于孢子萌发和菌体的生长
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