微生物学实验11 -cmx2012.pptVIP

实验 11 环境因素对微生物生长的影响 一、实验目的 1、了解温度、紫外线及常用化学消毒剂对微生物的作用； 2、观察各因素对微生物生长抑制的强弱。 二、实验原理 微生物广泛地分布在自然界的各种环境中。环境中的物理因素、化学因素和生物因素对不同类型微生物的生长发育产生不同的影响，或生存、或抑制、或死亡。反之，由于微生物的生命活动对局部区域的小环境也会产生一定的影响，或产酸、或产碱、或产酶、或产生次生代谢产物，从而可以改变自然环境。由此，微生物与自然环境之间是相互影响、相互作用的矛盾统一体 当环境条件的改变，在一定限度内，可引起微生物形态、生理、生长、繁殖等特征的改变；当环境条件的变化超过一定极限时，则导致微生物的死亡。 通过人为设计的环境因素对微生物生长发育影响的试验，可以有助于理解环境条件与微生物生命活动之间的关系。 物理因素 紫外线可以引起微生物细胞核的核酸分子发生光化学反应，形成胸腺嘧啶二聚体和胞嘧啶与尿嘧啶的水合物，致使核酸变性。不同的照射剂量、照射时间、照射距离可以导致菌体死亡或发生变异。因此紫外线可作为物理诱变剂来进行微生物菌种的诱变和选育工作。 化学因素 生物因素 广谱抗生素？ 窄谱抗生素？ 抗菌谱 泛指一种或一类抗生素（或抗菌药物）所能抑制（或杀灭）微生物的类、属、种范围。如青霉素的抗菌谱主要包括革兰阳性菌和某些阴性球菌，链霉素的抗菌谱主要是部分革兰阴性杆菌，两者抗菌谱的覆盖面都较窄，因此属于窄谱抗生素（Narrow Spectrum Antibiotics）。而四环素类的抗菌谱覆盖面广，包括一些革兰阳性和阴性细菌，以及立克次体、支原体、衣原体等，因此为广谱（Boad Spectrum）抗生素。 三、实验器材 1、菌种 大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus albus）,自己分离的菌株 2、培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板 3、溶液及试剂 75%乙醇、2-4%结晶紫水溶液、1% 84消毒液、氨苄青霉素2 mg/ml、无菌水等。 4、仪器及设备 无菌小圆滤纸片若干、EP管2、移液枪和Tip、三角涂布棒、挡光物体(小于9cm) 、冰箱、培养箱、无菌工作台等。 四、操作步骤 分组： 6-8人一大组，9个琼脂平板。 （一）温度实验 接种0.1 ml大肠杆菌或金黄葡萄球菌到牛肉膏蛋白胨平板，以无菌涂布棒将菌液涂布均匀，放在4℃、37℃和50℃条件下倒置培养，24 h后观察。 （二）紫外线杀菌实验 1、用移液枪吸管吸取0.1 ml培养18 h的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液加入前述平板中，以无菌涂布棒将菌液涂布均匀。 2、打开培养皿盖，将消毒或灭菌后的挡光物体放入带菌平板表面，遮住培养基的一部分，在紫外线照射30 min（预热10 min），取出挡光体，包好（黑纸）培养皿，在37℃温室中倒置培养24 h后观察。 （三）化学消毒剂及抗生素实验 1、用无菌吸管分别吸取0.1 ml培养18 h的金黄色葡萄球菌菌液（1皿）和大肠杆菌菌液（1皿）加入上述平板中，涂匀。 2、划分平板底皿为若干等份，每一等份内标明一种消毒剂的名称； 3、用镊子将小圆滤纸片分别浸入装有各种消毒剂或抗生素的试剂瓶中浸湿(湿润就可以)；（无菌操作） 4、将上述滤纸片贴于含菌平板上（不可托动），倒置放于37℃条件下培养24 h后观察抑菌圈直径大小。 （四）未知菌株抑菌实验有无抑菌效果、广谱或窄谱 如何操作？ 发酵液加滤纸片 点接法 注意事项 培养皿标记清楚，不要混淆 琼脂平板接种量适当，涂布均匀。 各分区空间适当，不宜太小或太大。 滤纸片大小均匀，不应再培养基表面挪动滤纸片，避免试剂间互相干扰。 高温培养应避免培养基干裂。 金黄葡萄球菌是条件致病菌，请注意安全 紫外线对人体皮肤细胞等均具有杀伤作用，尽量避免其直射，特别要避免裸眼灼伤事故的发生等。 紫外线杀菌效果因菌而异，因介质不同其效果也不同 五、思考题 1、在紫外线实验中为什么要进行暗培养？ 2、进行紫外线对微生物生长影响的试验时，不开皿盖就用紫外线照射是否可以?为什么？ 3、如何区分嗜冷微生物和耐冷微生物？ 4、举例：日常生活利用温度、pH和渗透压抑制细菌生长的例子。 5、化学药剂对微生物所形成的抑制圈内未长菌部分是否能说明微生物细胞已被杀死? 6、青霉素是抑菌还是杀菌？过一段时间后，抗生素平板上又长出少数菌落，你认为是什么原因？ 实验报告 条理清晰 现象描述 数据及表格处理（抑菌圈大小、可表格说明也可以绘图说明） 结论及分析 * * * * * * 一些化学药剂对微生物生长有抑制或致死作用，因此可选择适宜的化学药剂，配制成适宜的浓度进行消毒或灭菌。 消毒剂的杀（抑）菌能力，经常用石碳酸系数表示。P91