第七章抗体的标记.ppt

放射性核素与抗原抗体的结合物制备 一、基本方法 氯胺T(ch-T)法是常用的标记方法，氯胺T是一种氧化剂，它能使125I+液中带负电荷的碘离子氧化成带正电荷的碘，然后取代抗原酪氨酸残基芳香环上的氢 ch-T是对甲苯磺基酰胺的N-氯衍生物钠盐，在水中易分解成具氧化性的次氯酸：次氯酸可将125I﹣氧化成带正电荷的125I+，后者可取代抗原（或抗体）中酪氨酸残基苯环上的氢原子，形成稳定放射标记物；最后加入还原剂偏重亚硫酸钠（Na2S2O5）可终止反应 125I结合物制备 直接标记法—氯胺T法 化学或酶促反应，将放 射性负电碘离子氧化成 碘原子或正电碘离子， 通过取代反应置换被标 记物分子中酪氨酸或酪 胺残基以及组胺残基上 的氢原子。 125I- Ch-T氧化 125I或125I+ 取代反应 125I-标记物 （混合物） 氯胺T(ch-T)法 使用无还原剂的高比放射性碘源 ch-T用量要低 控制总反应体积200μl 反应时间1分钟～2分钟 弱碱性反应条件 二、放射性核素标记结合物的纯化 标记反应后形成的结合物不能直接使用，需去除游离125I和其他杂质。 游离125I和125I标记抗体（抗原）分子大小相差悬殊，采用凝胶层析即可分离，如葡聚糖凝胶（Sephadex G-50）柱层析。 125I结合物纯化 凝胶过滤法 离子交换层析法 聚丙烯酰胺凝胶电泳 高效液相色谱法 去除游