第3章植物组织培养与细胞.ppt

第3章 植物组织培养与细胞培养 东北大学生物技术研究所 3.3 植物组织与器官培养 3.3.1 植物组织培养的定义与分类 3.3.2 重要概念 3.3.3 细胞分化和形态建成 3.3.4 植物组织培养的基本步骤 3.3.5 植物组织器官培养 3.3.6 植物组织培养的应用 3.3.7 人工种子 3.3.8 植物组织与器官的生物反应器培养 3.3.9 植物组织与器官培养存在的问题 3.3.1 植物组织培养的定义与分类 1.定义 植物组织培养(plant tissue culture)是指在无菌条件下，将离体的植物器官（如根尖、茎尖、叶、花、未成熟的果实、种子等）、组织（如花药组织、胚乳、皮层等）、胚胎（如成熟和未成熟的胚）、原生质体等培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，诱发产生愈伤组织、潜伏芽，或者长成新的完整植株的一种实验技术。其理论基础是细胞的全能性。 3.3.2 重要概念 全能细胞（totipotent cell) 愈伤组织 (callus) 外植体 (explantation) 继代培养 (secondary culture) 胚胎培养 (embryo culture) 脱分化（dedifferentiation ） 再分化（redifferentiation) 茎尖培养 无性繁殖系 (clone) 器官发生（organogenesis) 胚状体（embryoid) 3.3.3 植物细胞分化和形态建成 一般植物通过细胞或组织培养达到再生目的要经过两个步骤： (1) 培养的植物细胞或组织的脱分化，形成愈伤组织； (2) 有新形成的愈伤组织形成一些分生细胞团，随后又由其分化成不同的器官原基（如根原基、叶原基等）。 3.3.4 植物组织培养的基本步骤 以胡萝卜为例，介绍植物组织培养的一般过程（图解）： （1）培养材料的采集 （2）培养材料的消毒 （3）制备外植体 （4) 接种和培养 （5）组培苗的练苗和移栽 （1）培养材料的采集 组织培养所用的材料非常广泛，可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶，有时也利用花粉粒和花药，其中根尖不易灭菌，一般很少采用。? 对于木本花卉来说，阔叶树可在一、二年生的枝条上采集，针叶树种多采种子内的子叶或胚轴。草本植物多采集茎尖。? 在快速繁殖中，最常用的培养材料是茎尖，通常切块在0.5厘米左右，如果为培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部分，其长度在0.1毫米以下。? （2）培养材料的消毒 先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。? 在无菌坏境中将材料放入70％酒精中浸泡30－60秒。? 再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01％升汞水中消毒10分钟。? 取出后用无菌水冲洗三、四次。? （3）制备外植体 将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。然后切成0.2－0.5厘米厚的小片，这就是外植体。在操作中严禁用手触动材料。? （4) 接种和培养 接种：　?在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种4－10个。? 封口：　?接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿用无菌胶带封口。? 温度：　?培养基大多应保持在25℃左右，但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。? 增殖：　?外植体的增殖是组培的关键阶段，在新梢等形成后为了扩大繁殖系数，需要继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中，增殖培养基一般在分化培养基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1个月左右后，可视情况进行再增殖。? 根的诱导：　?继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养。1个月后即可获得健壮根系。? （5）组培苗的练苗和移栽 试管苗从无菌以及光照、温度、湿度稳定的环境进入自然环境，必须进行炼苗。 一般移植前，先将培养容器打开，于室内自然光照下放3天，然后取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基质中，基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高的空气湿度（相对湿度98％左右），但基质不宜过湿，以防烂苗。 3.3.5 植物组织器官培养 1.定义 植物组织器官培养就是在植物细胞全能性理论指导下，在组织以及器官水平上开展研究的，其目的是实现植物细胞的全能性以完成植物生命周期的过程。 3.3.6 植物组织培养的应用 1. 无性系快速繁殖技术 2. 获得无病毒植株 3. 新品种培育 4. 在遗传、生理生化和病理等研究上的应用 5.