致病性菌检测方法-国家标准.docVIP

大肠杆菌检测方法 一、检测流程图 稀释液（1：10）10 ml 稀释液（1：10）10 ml 10 ml 双倍乳糖胆盐培养基 44±0.5℃ 不产酸不产气 产酸产气 划线伊红美蓝 1-2滴到蛋白胨水 37℃ 44±0.5℃ *典型菌落 无典型菌落 加靛基质试剂 0.5ml 革兰氏镜检 阳性：玫瑰红色 阴性：试剂本色 阴性短杆菌 非阴性短杆菌 粪大肠杆菌 注： （1） 代表非粪大肠杆菌，没必要在进行下一步鉴定。 （2）典型菌落：深紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，具有金属光泽。也有呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落。 二、培养基和试剂 1. 双倍乳糖胆盐培养基（货号：022041，厂家：广东环凯微生物科技有限公司） 称取60 g到1 L蒸馏水或去离子水，加热搅拌完全溶解，分装到带有小倒管的试管，115℃ 2. 伊红美蓝培养基（货号：022060，厂家：广东环凯微生物科技有限公司） 称取37.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，121 3. 蛋白胨水（货号：022110，厂家：广东环凯微生物科技有限公司） 称取25 g到1 L蒸馏水或去离子水，加热搅拌完全溶解，分装到试管，121℃ 4. 靛基质试剂 柯凡克试剂：5 g对二甲氨基苯甲醛溶于75 ml戊醇，缓慢加入浓盐酸25 ml。 5. 革兰氏染色 1）染液制备 结晶紫染色液