稳定期慢性阻塞性肺疾病细菌定植与炎症细胞的关系.docVIP

稳定期慢性阻塞性肺疾病细菌定植与炎症细胞的关系 堕虫管瘟盘志2007年5月第26卷第2期JournalofCardiovascularamp;PulmonaryDise∞es,May2007,Vo1.26,No.2103 稳定期慢性阻塞性肺疾病细菌定植 与炎症细胞的关系 黄惠雪王浩彦李京明徐秋芬刘美清 ? 临床论着? [摘要]目的:对稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者行痰定量细菌培养及痰细胞分类计数,以 探讨下呼吸道细菌定植对气道炎症的影响.方法:选择近1个月无急性发作病史的稳定期COPD患者, 通过痰诱导留取痰液,行痰定量细菌培养和痰细胞分类计数,比较下呼吸道细菌定植阳性组与阴性组的 痰中炎症细胞水平.结果:33例稳定期COPD患者接受痰诱导,其中11例(32.4%)存在下呼吸道细菌定 植(A组),22例为阴性(B组),A组痰中的嗜酸性粒细胞和中性粒细胞均高于B组(Plt;0.05),2组间的 淋巴细胞和巨噬细胞水平差异无显着性(Pgt;0.05).结论:下呼吸道细菌定植可加重稳定期COPD患者 的炎症反应,加重气流受限程度. [关键词]慢性阻塞性肺疾病;细菌定植;炎症细胞 健康人的下呼吸道是无菌的,但研究发现一部 分稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者存在下呼 吸道细菌定植,而且定植的细菌量与痰中的白细胞 介素一8(IL一8),白三烯B4(LTB4),肿瘤坏死因子一a (TNF—a)浓度水平存在正相关,提示细菌定植与气道 炎症有关.大量研究表明,在COPD患者的气道,肺 实质和肺血管中均存在着慢性炎症,中性粒细胞,巨 噬细胞,淋巴细胞,嗜酸性粒细胞等均参与了COPD 的慢性炎症过程.痰液是宿主呼吸道被覆的黏液纤 毛器和免疫系统与外界人侵的生物和非生物进行反 应的产物,因此痰液中的炎症细胞能反映呼吸道的 炎症反应.本研究通过比较下呼吸道细菌定植阳性 组和阴性组患者的痰液炎症细胞水平,探讨下呼吸 道细菌定植对气道炎症的影响. 资料与方法 选择2003年1月至2006年1月北京安贞医院 呼吸科门诊及住院患者33例,行痰定量细菌培养及 痰细胞分类计数.所有人选对象均符合以下标准: 1.年龄lt;80岁;2.符合1997年中华医学会呼吸系 病学会组织制订的COPD诊治规范(草案)中关于 COPD的定义.且第一秒呼气容积/用力呼气容积 (FEV./FVC)lt;70%;3.近1个月无急性发作病史. 作者单位:100029北京首都医科大学附属北京安贞医院呼吸科(黄 惠雪王浩彦徐秋芬)检验科(李京明刘美清) 排除标准:1.合并支气管哮喘,支气管扩张症,肺血 栓栓塞症及肺癌等其他呼吸系统疾病;2.合并严重 心脏疾病,肿瘤以及慢性消耗性疾病. 收集痰液:测定受试者的FEV1及FVC,以确定 气道受限的严重程度.嘱受试者清水漱口,雾化吸 人4%高渗盐水进行痰诱导,最长达10min,留取痰 液约10mL.痰诱导过程中若受试者出现喘憋情况 则立即停止,吸人p2受体激动剂(沙丁胺醇)…. 将咳出的痰液收集于无菌痰盒,显微镜下看痰液是 否合格(多核白细胞应gt;25个/低倍视野,鳞状上皮 细胞应lt;10个/低倍视野).否则重新留取痰液. 痰定量细菌培养:获取痰液后在lh内立即进 行培养.首先在痰液中加人稀释的Sputosol液(英 国OXOID公司),作用20min使痰液均质化. Sputosol液与痰液的比例为l:l,此l:l悬液视为原 液(定量计算时加以校正).预先准备好4个无菌试 管,每管含生理盐水4.5mL.吸取原液0.5mL于第 工稀释管内(10),再从第工稀释管吸取0.5mL于 第Ⅱ稀释管内(10),依次稀释,直到第工～Ⅳ稀释 管内痰液浓度依次为l0～～l0一.用l0接种环 取各个浓度(10至10)分别密涂接种于血琼脂平 皿,麦康凯琼脂平皿和巧克力琼脂平皿.置于5% 二氧化碳培养箱中,37℃培养24h.24h后根据菌 落形态特征,对细菌菌种做出初步判断,进行菌落计 数,再按照常规做细菌鉴定.计算后最终确定痰中 主要细菌的种类和数量(单位:CFU/mL). 痰细胞分类计数:取上一步留余的痰液,量取痰 104心肺血管病杂志2007年5月第26卷第2期JournalofCardiovascularamp;PulmonaryDiseases,May2OO7,Vo1.26,N0-2 量,加4倍体积的0.1%二硫苏糖醇(dithiothreitol, DDT)去黏液处理.反复摇匀震荡,使之成为均匀的 混悬液.将混悬液放入离心机,以3000rpm离心10 min,取离心后的沉淀涂片,自然晾干后行刘氏染色 (uuSSTAIN),即改良的瑞氏染色(WrightS staining),取快速染液A液(台湾东耀生物科技有限 公司)约0.8mL于痰推片上