第8章有关的部分实验技术.pptVIP

2、克隆化的目的 1） 是细胞建株的必经过程，以得到遗传特征相同的细胞； 2） 就杂交瘤而言，可从中筛选出稳定而同源的杂种细胞系，淘汰遗传不稳定的杂交瘤细胞。 3） 减少非分泌型无关细胞生长过快。 注意事项： ①待克隆细胞生长处于对数增长期； ②小牛血清的质量和浓度； ③细胞计数要准确； ④及时观察细胞生长情况。 3、饲养细胞的种类 对于培养小鼠细胞来说，主要有下列各种细胞可供作为其饲养细胞： ①胸腺细胞,用量为106/0.2ml ②正常的脾细胞； ③传代培养中的大鼠胚胎成纤维细胞； ④腹腔细胞其用量为2×104/0.2ml，腹腔细胞是使用得最普遍的饲养细胞。 胚胎成纤维细胞因在细胞培养条件下有分裂增殖的能力，故只适应于软琼脂平板法培养中，该细胞铺于平板的底层。 饲养细胞的作用 ①提高培养细胞的密度，使待克隆细胞容易生存与繁殖。 ②腹腔细胞能清除培养中的死亡细胞，从而促进单个细胞克隆的生长。 ③饲养细胞能释放诸如细胞生长因子类物质，起到促进细胞分裂、增殖的作用。 4、克隆化培养方法： 按其分离单细胞的方法不同，大致可分为有限稀释法、软琼脂平板法、显微操作法及荧光激活细胞分类器法等数种 。 1）、有限稀释法 有限稀释法原理是从理论上将细胞稀释到10个/ml，然后装成每小孔(96孔板) 0.1ml，使每孔理论上含有单个细胞，经过培养