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环境微生物综合性实验报告 官洲河段不同断面微生物群落分布的测定 见习类型 专业见习 院 别 化学与环境学院 专 业 环境工程 指导教师 成文老师 班 级 2010级环境工程 姓 名 翟锦亮 学　 号 20102400132 2012年12月 目录 TOC \o 1-2 \h \z \u 27241 1. 前言 3 10878 2. 实验方案与思路 3 28305 3. 实验方法 3 3.1 仪器 28305 3 3.2 试剂 4 3.3内容 4 3801 4. 实验结果 8 4.1 水样观察 15405 8 4.2 水样细菌总数的计算 20124 9 4.3 水样菌落的培养观察 14654 9 4.4 水样菌落数的计算 15405 11 4.5 微生物个体菌种形态的观察 12 4763 5. 实验分析 13 5.1 实验结果分析 15405 13 5.2 实验存在问题 20124 14 5.3 实验改进意见 14654 15 30249 6. 实验结论 15 18765 7. 实验收获 15 4763 参考文献 16 1. 前言 微生物的群落结构与功能是微生物生态学的研究主题之一。水体中微生物与区域环境有着密切的联系,其数量及种群分布与水的类型、有机物含量、微生物的拮抗作用等多种因素密切相关。对它的研究将有助于了解水体的富营养现状及水域中C、N、P循环方式,并可为水体的整体治理方案提供依据[2]。 本实验将大学城官洲河段到入珠江段分为三个断面（对照断面，控制断面，消减断面），在同一天同一时间段对各断面水体的水样分别采样比较，测定水体中微生物的种类和数量，了解官洲河段不同断面的水体中存在的微生物的种类和数量，分析各断面中微生物群落的分布特点，了解各断面水体污染情况以及污染物对水体中微生物群落的影响。 2、实验方案与思路 2.1 采样容器的洗涤和灭菌 2.2 水样的采集 2.3 水样微生物的观察 2.4 培养基的制备 2.5 微生物的纯种分离与培养 2.6 微生物菌种的革兰氏染色 微生物菌种的观察与鉴定 3.实验方法 3.1 实验仪器 高压灭菌类：培养皿（12个）、试管（9支）、移液管（3支，1mL）、高压蒸汽灭菌器、 锥形瓶（1个） 制备培养基类：烧杯（1000mL）、药物天枰、玻璃棒、药匙、pH试纸、加热器、超净工作室、恒温培养箱 观察类：显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、血球计数板、滴管、烧杯、 量筒（1个，10mL） 3.2 实验试剂 肉膏胨淀粉培养基配方[1]：牛肉膏3g，蛋白胨10g，淀粉2g，氯化钠5g,琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH：7.4~7.8,。 灭菌条件：0.101MPa(121oC，15~20min)。 革兰氏染色液一套：草酸铵结晶染色液，革兰氏碘液，体积分数为95%的乙醇，番红染液 其他：去离子水、无菌水 3.3实验内容 ①实验器材的洗涤与灭菌【1】 将培养皿、试管、移液管用洗衣粉洗刷并用自来水冲洗干净，再用去离子水冲洗1—2次，然后用报纸包好放入高压蒸汽灭菌器中灭菌（121oC，相对蒸汽压力0.103MPa，15—20min），灭菌后放入无菌室备用。 ②水样的采集 按下图所示分别到三个采样点进行采样。采样时，应小心开启包装纸或瓶盖，避免瓶盖或瓶颈受到杂菌污染。 ③水样的保存 为防止微生物发生质的改变, 装好的样品瓶要在绝热箱中运送。当外界温度较高时还要冷却, 采样容器也不要受任何直接阳光照射, 以免紫外线杀死微生物。采好的水样应立即送往实验室, 一般从取样到检验不宜超过两小时, 否则应使用10oC以下的冷藏设备保存样品, 但不得超过6小时,实验室接到送检样品后, 应将样品立即放入冰箱, 并在两小时内进行检验, 如果因路途遥远, 送检时间超过6小时, 应考虑采用延迟培养法[4]。 ④水样微生物的观察与计数 A.水样微生物的观察 （1）观察比较从三个断面（对照断面、控制断面、削减断面）取回来的水样，简单描述三个水样的外观特征。 （2）用压滴法分别制片观察三个断面的原水样水中微生物的种类、数量和形态。 *压滴法制片方法[1]：如下图所示，取一片干净的载玻片放在实验台上，用滴管吸取样品于载玻片中央，用干净的盖玻片覆盖在液滴上（注意不要有气泡）即成标本片，用低倍镜和高倍镜观察，要充分利用显微镜的移片夹的移动，注意观察微生物组成。 B.水样细菌总数的测定【1】 （1）血球计数板的细胞计数 1）稀释：将样品稀释至合适的浓度，一般将样品稀释至每一中格约有15~20个细胞数为宜。本实验为了方便操作，故直接使用用于水样细菌稀释培养