黑曲霉发酵玉米淀粉生产柠檬酸.docVIP

清 华 大 学 学 报 (自 然 科 学 版)Jo u rna l o f T sing 清 华 大 学 学 报 (自 然 科 学 版) Jo u rna l o f T singh ua U n ive r sity (Sc i T ech ) 15?34 第 6 期 第 52～ 55 页 1998 年 第 38 卷 黑曲霉发酵玉米淀粉生产柠檬酸 石忆湘, 刘祖同 清华大学 生物科学与技术系, 北京 100084 文 摘 用紫外线和亚硝基胍诱变相结合的方法, 从野生黑 曲霉菌株出发, 经多次诱变筛选, 得到一株能够较好地利用 玉米淀粉生产柠檬酸的黑曲霉菌株A . n ig e r 95。对A . n ig e r 95 在摇瓶和发酵罐上用玉米淀粉发酵产生柠檬酸的适宜条 件作了详细研究。经过比较, 认为摇瓶产生柠檬酸的适宜培 养基配方及发酵条件为: 玉米淀粉 20% ( 均为质量分数, 下 使得一些柠檬酸生产企业无法承受。 而玉米粉资源 丰富、价格低廉, 完全可能代替薯干进行发酵。 用玉 米淀粉生产柠檬酸受到各方面的密切关注。 1 材料和方法 1. 1 材料 同 )、(N H 4 ) SO 4 2% 、KH 2PO 4 012% 、M gSO 4 r 7H 2O 0. 出 发 菌 株 本 实 验 室 保 存 的 野 生 黑 曲 霉 0. 05% , 甲醇 3% , 初始 pH 3. 0。接种液体种子 5% , 30℃ 200 r?m in 发酵 7 d, 柠檬酸产量 1018% 。在 6. 6 L 的B io f lo 2| 型 发酵罐上设定 30 ℃, 500～ 600 r?m in , pH 4. 0, 1. 2～ 2. 5 L ?m in 的通气量, 发酵 132 h , 柠檬酸产量为 913% 。可用价格 低廉、来源丰富的玉米淀粉代替传统的薯干, 作为发酵生产 柠檬酸的原料, 为实际生产奠定了基础。 关键词 黑曲霉; 柠檬酸; 玉米淀粉; 发酵 分类号 Q 939197 (A sp e rg illu s n ige r) 菌株。 其柠檬酸产酸率不超过 2% 。 培养基 斜面培养基、种子培养基: 麦芽汁培 养基。 其他培养基的配方见表 1 (w 为质量分数)。 表 1 摇瓶初筛 (1)、复筛 (2) 和选定的 (3) 培养基配方 w ×100 成 分 (1) (2) (3) 蔗糖 玉米淀粉 (N H 4 ) 2SO 4 KH 2PO 4 M gSO 4r7H 2O 甲醇 14 - 0. 2 0. 2 0. 05 - - 15 0. 2 0. 2 0. 05 - - 20 0. 2 0. 2 0. 05 3 柠檬酸是目前以微生物发酵生产的重要有机酸 之一, 它的用途非常广泛, 需求日益增长。 目前国内 柠檬酸年产量约 215 ×105 t, 其中半数以上供出口 之用。 从世界的需求来看, 2000 年总需求预计将达 到 715×105 t 左右, 而目前世界柠檬酸总生产能力 约 615×105 t?a , 缺口很大。 80 年代, 我国国内的柠 檬酸消费急剧上升, 速度远远超过了西方发达国家。 随着人民生活水平的提高, 对食品和饮料等含柠檬 酸制品的需求量猛增, 但就人均消费量来看, 我国的 柠檬酸消费还是很低的, 以用于食品和饮料的柠檬 酸为例, 1990 年美国和日本的人均消费量分别为 384 g 和 118 g, 而我国则仅为 20 g 左右, 市场潜力 巨大, 因此增加柠檬酸生产不仅可以满足国内日益 增长的需要, 也是换取外汇的重要手段之一。 我国的柠檬酸生产主要以薯干为原料进行发 酵。 由于近年来薯干粉大幅度涨价, 生产成本增高, 1. 2 方法 诱变方法 培养方法 紫外线诱变, 亚硝基胍诱变 取孢子刚刚成熟 ( 即 30℃培养了 2 ～ 3 d ) 的 A . n ig e r 麦芽汁斜面, 总计加入约 30 mL 无菌生理盐水洗孢子, 将洗下的孢子转移到种子培 养基中, 30℃, 200 r?m in 培养约 24～ 27 h。此时A . n ig e r 在种子培养基中形成直径约 1～ 2 mm 的菌球 体。每瓶发酵培养基中接种 5 mL 这样的液体种子, 30℃发酵。终止发酵后, 过滤掉菌丝体, 收集发酵液, 进行产酸及其它分析。 分析方法 酸度测定 取发酵滤液 1 mL , 以酚酞为指示剂, 用标准 011429 m o l?L N aO H 滴定。 求得产酸率。 纸层析法分析柠檬酸的纯度 收稿日期: 1997201214 第一作者: 男, 1970 年生, 硕士研究生 展开剂 V ( 正丁醇) ∶V 展开剂 V ( 正