色谱柱的选择与维护.pdfVIP

液相色谱柱的选择与维护 宣讲人：王正帅 职务：International Technical Supporter and India Sale 电话 Email：zhengshuai_wang@ 天津博纳艾杰尔科技 2011年5月 1 内容概要  液相色谱基本知识  液相方法开发与色谱柱的选择  HPLC色谱柱在2010版药典中的应用  色谱柱的保养与常见故障排除 2 液相色谱基本知识 一、基本概念与术语  色谱图 （Chromatograph ）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲 线，又称色谱流出曲线（elution profile ）  基线 （Base line）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间 的流出曲线。一般应平行于时间轴  噪音 （Noise）――基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器 不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致  漂移 （Drift）基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相 及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移.  色谱峰 （Peak）--组分流经检测器时相应的连续信号产生的曲线 3 液相色谱基本知识  峰底――基线上峰的起点至终点的距离  峰高（Peak height, H）――峰的最高点至峰底的距离  峰宽 （Peak width, W ）--峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离 。W=4σ  半峰宽 （Peak width at half-height, Wh/2 ）--峰高一半处的峰宽。W h/2 ＝ 2.355σ  标准偏差（standard deviation, σ ）--正态分布曲线x= ±1时（拐点）的峰宽之半 。正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱 过程中的分散程度。σ小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之， σ大，峰形胖、柱效低  峰面积 （Peak area, A）――峰与峰底所包围的面积 2.定性参数（保留值）  死时间 （Dead time,t0 ）--不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱 柱的时间。在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间 4 液相色谱基本知识  死体积 （Dead volume,V0 ）―― 由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所 占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（ 被流动相占据，Vm ）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与 色谱平衡过程，其他3部粉只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽 量减小.  保留时间 （Retention time , tR ）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值 的时间 3.柱效参数  理论塔板数 （Theoretical plate number,N）用于定量表示色谱柱的分离效率（简 称柱效）。 N取决于固定相的种类、性质（粒度、粒径分布等）、填充状况、柱长、流动相 的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。如果峰形对称并符合正态分布，N可 近似表示为： N=16(tR/W)2 =5.54(tR/W1/2)2