《峄城主栽石榴品种ISSR分子标记引物筛选论文》-毕业设计（论文）.docVIP

l 学 士 学 位 论 文 峄城主栽石榴品种ISSR分子标记引物筛选 姓 名： 学 号： 1 指导教师： 系 别： 专 业： 完成日期： 摘 要 本研究以峄城万亩石榴园的石榴幼叶为材料,采用CTAB法提取石榴基因组DNA。利用电泳和紫外分光光度法分析其完整性、纯度及浓度. 利用ISSR标记技术对42个石榴品种遗传关系进行了分析。筛选出多态性高的UBC811 ISSR引物，共扩增出29条DNA条带，其中多态性带7条，多态性百分率为21.12%，特异条带1条。 【关键词】石榴；ISSR；种质资源；遗传多样性；亲缘关系 Abstract 目录 TOC \o 1-3 \h \z \u 第1章 引 言 1 1.1ISSSR 分子标记 1 1.2本研究的目的与意义 4 第2章 材料与仪器 6 2.1 材料 6 2.2 试剂 7 2.3 仪器设备 8 第3章 实验方法 9 3.1 CTAB法提取DNA 9 3.2 DNA浓度和纯度测定方法 10 3.2.1 DNA质量检验方法 10 3.2.2 DNA的浓度和纯度测定方法 10 3.3 PCR扩增反应 10 3.4 电泳与成像 11 3.5 数据获取与分析 11 第4章 结果与分析 12 4.1 石榴基因组DNA?的提取结果分析 12 4.1.1 DNA完整性分析及两种提取方法的比较 12 4.1.2 DNA纯度和浓度测定结果 13 4.2 ISSR扩增结果 第5章 结论与讨论 18 5.1 讨论 18 5.2结论 18 参考文献 19 致 谢 22 石榴叶中DNA提取和RAPD体系中引物的筛选 PAGE 22 第1章 引 言 石榴（Punica granatum L．）为石榴科石榴属落叶灌木或小乔木，又名若榴、丹若、天浆、金罂、狂花等。石榴原产伊朗、阿富汗等中亚一带，从西汉张骞出使西域将涂林安石榴引入我国，至今已有超过2 000 年的栽培历史[1]，经长期天然杂交及基因突变，以及采用实生、分株、嫁接等多种繁殖方法，使其产生了复杂多样的品种和类型，据不完全统计，我国现有石榴品种资源约200多个，分布南北各地20多个省区。各地研究者对石榴种质资源进行调查研究时，大多都局限于某一地区，各自从不同的角度对石榴进行了种下分类，导致品种混杂、同种异名、同名异种的现象出现[2]，长期以来，给准确进行品种资源鉴定和利用带来了困难。我们究旨在利用ISSR标记技术，对石榴的遗传多样性与亲缘关系进行分析，以期为石榴种下分类提供分子依据，为更有效地保护石榴资源及选育新品种提供遗传信息。 1.1 ISSR分子标记 ISSR(inter－simple sequences repeats)即简单序列重复区间标记法，是由Zietkiewicz等1994［7］年提出的一种DNA标记技术，该技术检测的是2个相近SSR之间的一段短DNA序列上的多态性．在SSR的3’端或5’端加锚1～4个嘌呤或嘧啶碱基，并以此作为引物，通常为16～18个碱基序列，对两侧具有反向排列的SSR之间的一段DNA序列进行扩增，然后进行电泳、染色，根据谱带的有无及相对位置，来分析不同样品间ISSR标记的多态性．由于ISSR引物碱基数量多，退火温度高，可重复性好，非特异性扩增少，真核生物富含SSR序列且变异最快，故ISSR扩增出的条带多且多态性要比RAPD，SSR，RFLP等更加丰富．ISSR为显性标记，符合孟德尔遗传规律，并且无需克隆、制备探针、分子杂交等工作，具有简便迅速、高效、实验成本低等优点．因此，ISSR技术现已在遗传多样性［8］、亲缘关系分析［9］、遗传作图［10］、品种鉴定［11］、进化［12］等研究方面被广泛应用．ISSR被认为是研究种群遗传多样性的一种非常有效的分子标记手段［13－17］ 1.2本研究的目的与意义 枣庄是我国的主要石榴产区之一,栽培面积达1.6万公顷，具有48多个种，被誉为“冠世榴园”。近年广泛开展了种质资源的调查、收集、保存和良种选育工作,并在此基础上，对峄城石榴的种、变种、品种的划分、评价、利用等问题进行了分析研究[6]。但由于长期的引种和选择,已很难从植物的外部形态上来确定品种的来源和品种间的亲缘关系，存在着同名异种或同种异名的问题[8]，这给准确进行品种资源鉴定和利用带来了困难。 近年来，